Generación de un modelo para el estudio de la modulación de la quimioresistencia mediante el uso de ARN de interferencia acoplado a nanoparticulas magnéticas

BATALLA M; CERDA MB; BENEDETTI L; PODHAJCER O; ZYSLER R; PLANK C; DURAN H; POLICASTRO L

Congreso; LVI Reunion Anual Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2011

La quimioresistencia es una de las principales causas de fracaso de los tratamientos oncológicos. En particular, el 5-fluorouracilo (5-FU) es la droga quimioterapéutica más utilizada para el tratamiento del cáncer colorectal. Sin embargo, la respuesta de los pacientes es solo del 15%, y en combinación con otras drogas como el oxaliplatino se obtiene una mejora en la respuesta del 40-50%. El objetivo de este trabajo es desarrollar un modelo en cáncer de colon para futuros estudios de quimiosensibilizacion mediada por el silenciamiento de genes asociados a la quimioresistencia utilizando nanovectores. Hemos desarrollado tres sublíneas celulares resistentes al 5-FU a partir de las líneas Caco-2, T-84 y HCT-116, denominadas Caco-2R, T-84R y HCT-116R respectivamente. Las sublíneas resistentes (SLR) se desarrollaron a partir de cultivos de las líneas parentales (LP) en dosis crecientes de 5-FU durante 6 meses. Las SLR mostraron 8-10 veces un incremento en la dosis inhibitoria 50  (IC50) respecto de las LP (p<0.01). La tasa de proliferación fue significativamente menor en las SLR respecto de las LP (p<0.01). Los niveles de expresión de Ku70, marcador de reparación de daño al ADN fue significativamente mayor en las SLR respecto de las sensibles (p<0.05). Por otro lado, también hemos obtenido un clon de la línea Caco-2 expresando la luciferasa de manera estable, a fin de generar un sistema de estudio para la optimización de nanovectores portadores de miRNA o siRNAs. En este sentido, hemos clonado el miARN contra la luciferasa en el plásmido pcDNA3 y lo hemos acomplejado a nanopartículas magnéticas. Estos complejos silenciaron en un 80% de la expresión de la luciferasa en presencia de un campo magnético (p<0.01). De este modo, hemos generado un modelo para futuros estudio de silenciamiento de genes asociados a la quimioresistencia mediante el silenciamiento de genes utilizando ARN de interferencias (siRNA o miRNA) en nanovectores asociados a nanopartículas magnéticas.