Caracterización electroforética de distintas isoformas de PCL

PARVORELL F. A.,; MIRABITO P.V.,; CHAUFAN G.,; SAN MARTÍN DE VIALE L. C.,; RÍOS DE MOLINA M. C.

Puerto Iguazú, Misiones, Argentina

Congreso; Reunión Nacional de la Asociación Argentina de Investigaciones Bioquímicas. XXX SAIB.; 1994

Asociación Argentina de Investigaciones Bioquímicas. SAIB.

Aplicando la metodología puesta a punto en este laboratorio (SAIB/93) se purificó la porfirinógeno carboxi-liasa de hígado de rata. Se realizó un seguimiento electroforético de todos los pasos de purificación mediante electroforesis en gel de poliacrilamida. Los geles fueron corridos por duplicado, para poder revelarlos con Coomasie por una parte y con el sustrato o el inhibidor por la otra. El revelado con uroporfirina dio solo positivo en muestras de los pasos tempranos de la purificación en las que se pudieron visualizar dos bandas, no así en las etapas finales. Por tal motivo se provó una nueva strategia de revelado, que consistió en incubar los geles con la mezcla de incubación completa, incluyendo la uroporfirina como porfirinógeno, aún así el método no resultó lo suficientemente sensible. De los revelados para proteínas pudimos comprobar que las muestras se van enriqueciendo en sustancias de PM inferior a 60.000 a lo largo de la purificación, correspondiendo la actividad enzimáticaprobablemente a especies de PM 40.000. Se revelaron también especies de PM 90.000 que podrían corresponder a agregados moleculares de isoenzimas que fueron detectadas a nivel de Sephadex G-75.