Caracterización de la uroporfirinógeno decarboxilasa (UroD). Estudios sobre isoenzimas y sobre su sitio activo.

RÍOS DE MOLINA M. C.,; GUIDI S.,; CHAUFAN G.,; CORVI M. M.,; ARMESTO A.,; ALDONATTI C.,; SAN MARTÍN DE VIALE L. C.

Villa Carlos Paz, Córdoba, Argentina

Congreso; Reunión Nacional de la Asociación Argentina de Investigaciones Bioquímicas. XXXI SAIB; 1995

Asociación Argentina de Investigaciones Bioquímicas. SAIB

La Uroporfirinógeno decarboxilasa (UROD) es la quinta enzima del camino metabólico del hemo. La enzima hepática es blanco de acción de los hidrocarburos aromáticos polihalogenados y es clave en el desarrollo de la porfiria. Para caracterizar las dos isoformas de la UroD de hígado de rata, las purificamos a homogeneidad (aplicando el esquema de purificación presentado en SAIB/94) y ensayamos el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática. Los resultados indican que las reacciones catalizadas por las posibles isoenzimas, por nosotros propuestas, tendrían distintas energía de activación y distinta temperatura óptima. Por otra parte se realizó el análisis por SDS-PAGE de los eluídos de la columna de G-75 (último paso de purificación) encontrando solo una banda proteica, muy mayoritaria, en los eluídos de máxima actividad, con PM 38.000 y 45.000, respectivamente, más dos bandas minoritarias de alto PM en todas las muestras, por lo que consideramos que debe ser un contaminante, posiblemente Abl. Las proteínas mayoritarias tienen tanto actividad con Uro I como con UroIIIcomo sustrato y por datos previos sabemos también que decarboxilan Penta III. De todo esto postulamos que serían isoenzimas con actividad respecto de todos los sustratos fisiológicos.             Respecto del sitio activo: se estudió el efecto de dos reactivos de grupo carboxilos, el N-etil-5-fenilisoxazolium-3’-sulfato y 1-ciclohexil-3-(2-morfolino-ethil)-carbodiimida-meto-p-toluensulfonato (7-21 mM), ambos reactivos provocaron inhibición, en una manera dosis dependiente, por lo que al menos un grupo carboxilo estaría involucrado en el sitio y/o en el centro activo de la enzima, aunque no descartamos la posibilidad de que el efecto sea a nivel del sustrato. De estos resultados proponemos que los grupos carboxilos ayudarían a posicionar al sustrato, en tanto que grupos histidina estarían en el sitio activo de la enzima.