CARACTERIZACIN DE FACTORES DE INHIBICION LIPÍDICA SECRETADOS POR CÉLULAS MAMARIAS: EFECTO SOBRE LA DIFERENCIACIÓN Y METABOLISMO OXIDATIVO DE ADIPOCITOS

ADOT F; SACCA PA; CALVO JC; GUERRA LN

Mar del Plata

Congreso; LIII REUNION CIENTIFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigaci¨®n Cl¨ªnica (SAIC), REUNION CIENTIFICA Sociedad Argentina de Fisiolog¨ªa (SAFIS); 2008

Factores proteicos (TgIF) presentes en medios condicionados (MC) por c¨¦lulas de NMMG (epitelio mamario), JEG-3 (citotrofoblastos) y C6 (glioma) son activos para la inhibici¨®n de la acumulaci¨®n l¨ªpidos (Tg) en adipocitos 3T3-L1 (NMMG (66%), JEG-3(37%) y C6 (17%)). El ensayo de actividad consiste en inducir la diferenciaci¨®n de 3T3-L1 en presencia o ausencia del MC y cuantificar Tg. Con el objetivo de purificar y caracterizar estos TgIF, cromatografiamos los MC por columna de HiPrep Sephacryl S-200, y analizamos los elu¨ªdos activos por prote¨®mica, realizando electroforesis bidimensional de poliacrilamida (EF) y caracterizando la/s prote¨ªna/s de inter¨¦s por MALDI-TOF. Se analiz¨® el efecto temporal del MC de NMMG sobre el nivel de Tg y de glutati¨®n reducido (GSH). Se compara el nivel de Tg en c¨¦lulas diferenciadas (CP), no diferenciadas (CC) y tratadas con MC. La acumulaci¨®n de Tg est¨¢ significativamente aumentada al d¨ªa 14 post diferenciaci¨®n (CP: 2.74 + 0.49 vs CC: 0.45 + 0.21 ¦Ìg Tg/¦Ìg prot, p< 0.01). MC-NMMG produce inhibici¨®n de 70 % en acumulaci¨®n de Tg a partir del d¨ªa 6 post diferenciaci¨®n (CP: 0.09 + 0.01 vs CP+MC: 0.03 + 0.01 p< 0.01), que se mantiene hasta el d¨ªa 14 post diferenciaci¨®n. El nivel de GSH aumenta durante la diferenciaci¨®n, siendo significativo al d¨ªa 14 post diferenciaci¨®n (CP: 510 + 25 vs CC: 320 + 16 ¦Ìmol GSH / g prote¨ªna, p< 0.01), MCNMMG produce disminuci¨®n significativa en GSH (110 + 12 ¦Ìmol GSH/ g prote¨ªna.). La fracci¨®n activa de los MC fue elu¨ªda en columna calibrada a un volumen similar (NMMG = 109, JEG3= 95, C6 = 100 ml), estos elu¨ªdos dieron en la EF una banda de aproximadamente 60.000 que fue caracterizada. Conclusi¨®n:Conclusi¨®n: TgIF provoca tempranamente la inhibici¨®n sobre la acumulaci¨®n de Tg, aunque esta inhibici¨®n no ser¨ªa total; como efecto colateral evitar¨ªa el incremento de GSH observado durante la diferenciaci¨®n. Nuestros primeros Resultados indicar¨ªan que TgIF podr¨ªa ser una galactosa 3-O- sulfotransferasa.