El factor de diferenciación BFD1 se expresa en taquizoítos de la cepa RH de Toxoplasma gondii

BONARDI MABEL; NÁJERA ROSARIO; CRISTALDI, CONSTANZA; GANUZA AGUSTINA; ANGEL, SERGIO O.; VANAGAS, LAURA

Congreso; XI Congreso de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2022

Toxoplasma gondii es un protozoo intracelular obligado de interés en salud humana y animal. Presenta dos estadios: taquizoito, activo y bradizoíto, latente con formación de quistes. Recientemente se descubrió un factor de transcripción maestro, BFD1, el cual por sí solo sería capaz de inducir la diferenciación a bradizoíto en la cepa cistogénica Me49 en condiciones normales de cultivo. Aún en esas condiciones, su ARNm es transcripto lo cual sugiere que el control de su expresión es a nivel traduccional. La cepa virulenta, RH no genera quistes in vitro cuando es crecida en condiciones de diferenciación. Sin embargo, una de las mutantes RH generadas para la histona H2B.Z (intercambio de 5 lisinas acetilables por argininas) aumentó su tasa de diferenciación. Por ello, quisimos indagar si, en este caso, BFD1 está cumpliendo alguna función. Se estudió in silico el gen de interés (TGME49_200385) y se diseñaron cebadores para detectar la expresión de BFD1 por RT-PCR a partir de RNA extraído de taquizoítos frescos. Dicha expresión se detectó en RH y RH mutante. Debido al gran tamaño de BFD1 (2258 aminoácidos), se eligió un fragmento de 126 aminoácidos que abarca los dos motivos Myb de unión al ADN. Dicho fragmento, se sintetizó y clonó comercialmente en un vector de expresión compatible con E. coli (pET 28 a+). Se ensayaron diversas condiciones de expresión y se purificó el fragmento de la proteína recombinante rBDF1myb en condiciones desnaturalizantes. El mismo, se utilizó para inmunizar un conejo y el suero obtenido se evaluó por dot blot y Western-blot a partir de geles PAGE-SDS largos para detectar proteínas de alto peso molecular (BFD1 ~ 245,726 kDa). Se observó una banda específica del peso molecular esperado. Si bien se requieren más experimentos confirmatorios, este hallazgo indicaría que en parásitos RH crecidos en condiciones normales se expresa BFD1 sin que eso lleve a la diferenciación, lo cual implicaría otro/s componente/s que regula/n la diferenciación.