Desarrollo de un proceso de producción y purificación de antígenos solubles de SARS-CoV-2, potenciales herramientas para el desarrollo de métodos de diagnóstico y diseño de vacunas

FUSELLI, ANTONELA; VILLARRAZA, CARLOS JAVIER; GARAY, ERNESTO; ANTUÑA, SEBASTIÁN; GASTALDI, VICTORIA; TARDIVO, MARÍA BELÉN; RODRÍGUEZ, MARÍA CELESTE; MUSSIO, PABLO; CERVETTI, JOAQUÍN; FONTANA, DIEGO; GUGLIOTTA, AGUSTINA; CEAGLIO, NATALIA; PRIETO, CLAUDIO

Congreso; XIII CONGRESO ARGENTINO DE VIROLOGÍA (CAV2021); 2021

Sociedad Argentina de Virología

El virus SARS-Cov2CoV-2, agente etiológico de la enfermedad de neumonía viral pandémica COVID-19, presenta 4 proteínas estructurales, siendo el antígeno Spike (S) el que brinda genera la mayor respuesta protectora al estimular la producción de anticuerpos neutralizantes. Por este motivo, Spike constituye el blanco elegido para el diseño de vacunas y métodos de diagnóstico. En el presente trabajo se llevó a cabo el diseño y síntesis de la secuencia de dos proteínas quiméricas compuestas por regiones estructurales de la proteína S del virus SARS-CoV-2: Spike y RBD (Receptor Binding Domain). Las mismas poseen un péptido señal para su exportación al medio de cultivo, constituyendo antígenos solubles, y un ?tag? de histidinas para favorecer su purificación. Las secuencias fueron clonadas en vectores de expresión para células animales, que fueron empleados para la generación de líneas celulares estables mediante transfección de células sHEK293T y posterior selección. Mediante SDS-PAGE seguido de western blot se seleccionaron las líneas celulares que presentaron mayor productividad de Spike y RBD. Ambas líneas fueron cultivadas en biorreactores de 1 L operados en modo perfusión. La purificación de ambas proteínas a partir de los sobrenadantes de cultivo se llevó a cabo mediante cromatografía de afinidad a metales inmovilizados (IMAC), obteniéndose una elevada recuperación y una pureza superior al 98%. De esta manera, se obtuvieron cantidades adecuadas de antígenos de SARS-CoV-2 con una calidad óptima para diversas aplicaciones, incluyendo su evaluación antigénica en animales, su empleo para la generación de anticuerpos para desarrollar kits de diagnóstico, y su uso en pruebas serológicas para el monitoreo epidemiológico.