solation and primary culture of llama (Lama glama) cells and oviduct epithelium

MARURI, A.; LOMBARDO, DM.; MIRAGAYA, MH.; TRASORRAS, VL.; AGUERO, A.

Veterinary Research (Invet – Investigación Veterinaria)

BM Press

Lugar: Buenos Aires; Año: 2010 vol. 12 p. 285 - 286

1514-6634

El objetivo del presente trabajo es comunicar el primer aislamiento y cultivo primario de células luteales (CPCL) y el cultivo primario de células oviductales de llama (CPCO). Los ovarios y oviductos fueron obtenidos mediante una laparotomía por el flanco bajo anestesia general. Las muestras se colocaron en solución PBS con antibióticos, se disecó el cuerpo lúteo y se eliminó el tejido perioviductal. Se realizaron sucesivos lavados con PBS y se dispersaron por tratamiento mecánico y enzimático (tripsina 0.25%). Las células epiteliales del oviducto se obtuvieron mediante raspado  desde el extremo útero-tubárico hacia el extremo ovárico. Se realizó el recuento celular en cámara de Neubauer obteniendo una  viabilidad mayor al 90% con azul tripán. Se sembraron 309 células/mm²  en medio DMEM/F12 con antibióticos y 10% SFB y se incubaron a 38,5 °C en una atmósfera con 5 % de CO2. Se reemplazó el medio de cultivo cada 48 horas hasta su fijación con metanol alcanzada la confluencia (día 7/8). A las 48 horas de incubación se observaron bajo el microscopio invertido abundantes células adheridas agrupadas en clusters, estableciendo un íntimo contacto entre sí y alcanzando el estado de confluencia a los 7 días de crecimiento in vitro. Se capturaron imágenes en microscopio de campo claro utilizando el software IM50 (Leica). En el CPCO se distinguen células de aspecto epitelioide, sus núcleos son únicos, céntricos y ovalados aunque también se observan esféricos en menor número. Predomina la eucromatina y presentan grumos de heterocromatina uniformemente distribuidos. En el CPCL abundan células de aspecto epitelial con escasas prolongaciones citoplasmáticas de mayor tamaño que las células epiteliales oviductales. Los núcleos interfásicos presentan cromatina laxa con grumos dispersos de heterocromatina, son de ubicación central y de forma oval. El citoplasma vacuolado es indicativo de la actividad esteroideogénica de las células luteales. Este modelo experimental permitirá ahondar en la fisiología reproductiva y contribuirá a mejorar las técnicas de reproducción asistida en los camélidos.