Apoptosis in bovine granulosa primary cell cultures: morphological aspects and cell density dependence

CAROU, MC.; CRUZANS, PR.; FIORITO, CD.; REVILLA, M.; LOMBARDO, DM.

Veterinary Research (Invet – Investigación Veterinaria)

BM Press

Lugar: Buenos Aires; Año: 2010 vol. 12 p. 248 - 249

1514-6634

Se han identificado receptores de la hormona liberadora de gonadotropina (GnRHR) en células de granulosa ovárica (CG) y luteales. La activación de GnRHR en CG regula la función gonadal. Experiencias in vivo e in vitro de la regulación hormonal con agonistas de GnRH demostraron, en ovarios de ratas, un incremento en la atresia folicular. Con el objetivo de analizar el comportamiento de células de cultivo primario de granulosa de ovario bovino (CPGB), se realizaron 23 punciones de folículos de 3-8 mm y se analizó, a nivel morfológico, por tinción con hematoxilina el efecto apoptótico de 1, 10 y 100 nM de LA durante 24 y 48 hs de incubación. Las imágenes fueron capturadas mediante el uso de una cámara digital, modelo DC-180 de Leica y un sistema de captura de imágenes soportado por el soft IM50 de Leica a una magnificación de 150X.  Éste análisis arrojó resultados erráticos cuando los cultivos presentaban una densidad basal  de células por campo menor a 9, siendo estable cuando los cultivos presentaban una densidad de células por campo mayor a 9. Se analizaron 2 experimentos de alta densidad por ANOVA de dos vías y comparación de medias múltiple de Dunnett contra el control (p=0,0726, n=6; α= 0,1) observándose una inducción significativa de la apoptosis del 35 % para 100 nM LA. Este comportamiento dependiente de la densidad celular se observó también en las células de la línea establecida BGC-1, manteniéndose el mismo valor de cohorte. Se realizaron ensayos de actividad de caspasa 3, y citometría de flujo para la exposición de P-serinas mediante marcación con Anexina V-FITC y PI, pero la variabilidad de respuesta impidió hacer una estadística de las mismas. Poprtella y col., 2010,  en ensayos realizados in vitro han demostrado que diferencias en la densidad celular genera modificaciones en la relación estrógeno: progesterona (E2: P4) de los cultivos. Siendo conocida la relación entre la apoptosis y la esteroidogénesis por parte de CG in vitrio, la determinación de la relación (E2: P4) en cultivos podría orientarnos acerca del  motivo por el cual sólo a densidades elevadas se observa inducción de apoptosis como respuesta estable en células de granulosa de ovario bovino. En conclusión, la densidad celular es una variable que puede modular la apoptosis cuando se la analiza in vitro para una población de células granulosas de cultivo primario bovino, comportamiento que se manifiesta dependiente de la misma.