Rol del proceso apoptótico en la dinámica folicular

LOMBARDO, DM.

Veterinary Research (Invet – Investigación Veterinaria)

BM Press

Lugar: Buenos Aires; Año: 2010 vol. 12 p. 224 - 225

1514-6634

Es conocido el hecho que las células de la granulosa (CG) contribuyen en la maduracióndel ovocito y la mayoría de los factores de crecimiento que este necesita, actúan a travésde las mismas. Esta simple defi nición, hace que se considere como factor de suma importanciala viabilidad e integridad de las CG a lo largo del desarrollo folicular. Se ha establecido quela muerte de las CG durante la atresia folicular y la lúteolisis se da por apoptosis, proceso queen el folículo ha sido considerado como un evento fi siológico que elimina selectivamentelas células, manteniendo un equilibrio dinámico en la fisiología de la gonada femenina. Sinembargo, las vías mediante las cuales se regula la apoptosis en las CG no se encuentran plenamente estudiadas. Receptores de hormona liberadora de gonadotropina (GnRHR) se han identificado en las células de la granulosa y en las luteales.Análisis in vitro en cultivos primários de CG humana y porcina, demostraron que el acetatode buserelina (agonista de GnRH), indujo el aumento de cuerpos apoptóticos. Nuestro laboratorio encaró como objetivo general estudiar in vitro la regulación de la apoptosis en CG de ovario bovino utilizando acetato de Leuprolide (LA) como agonista de GnRH y ANTIDE como antagonista competitivo. Se trabajó tanto en una línea establecida de CG bovina (BGC-1) como en cultivo primario de CG bovina (CPGB). Para evaluar apoptosis a nivel experimental, se utilizaron diferentes técnicas; a nivel morfológico por tinción con DAPI y hematoxilina, a nivel bioquímico por TUNEL, citometría de flujo utilizando anexina V y DAPI y por actividadde Caspasa 3. A los fi nes de explorar las vías de regulación de la apoptosis se determinó laexpresión de Bax/Bcl-2 por Western Blot y la actividad de PLD (Fosfolipasa D).Tanto el análisis morfológico como el bioquímico demostró que el LA indujo apoptosis en las BGC-1 cuando fueron cultivadas durante 24 hs en presencia de SFB 5% a una concentración dosis dependiente y directamente proporcional a la misma (1, 10 y 100 nM LA). Asimismo, la preincubación por 3 hs con 100 nM de ANTIDE inhibe parcialmente la inducción de la  apoptosis por parte del LA a 100 nM. El hecho que la actividad de PLD sea disminuida tanto por LA como por ANTIDE permite pensar que el ANTIDE per se actúa a este nivel, induciendo activación de la Caspasa 3, y posiblemente a través de la vía extrínsecade regulación de la apoptosis. No ocurriendo a través de la vía mitocondrial ya que los niveles de Bax y Bcl-2 no son modifi cados por el ANTIDE. En CPGB la inducción es dosis dependiente e inversamente proporcional a la concentración. En presencia de ANTIDE, se observó una gran variabilidad de respuesta, siendo “la densidad de células por campo” el factor que la explica. Por citometría para Anexina V y PI sólo se observó apoptosis temprana, hecho que puede explicarse dada la observación de cuerpos apoptóticos fagocitados por células vecinas (fagocitosis homotípica – cultivos homologos). El soporte de esta hipótesis se basó en la contundencia de las imágenes confi rmadas por TUNEL en las que se demuestra la existencia de fagocitosis tanto para BGC-1 como para CPGB.