Tipificación de Mycobacterium avium subsp paratuberculosis a partir de aislamientos de materia fecal y órganos de ciervos

VERNA A, MORSELLA C, ZUMÁRRAGA M, GIOFFRÉ A, CASARO A, ROMANO M, CATALDE A, PAOLICCHI F.

ACTA BIOQUíMICA CLíNICA LATINOAMERICANA

Año: 2001 vol. XXXV p. 531 - 540

0325-2957

El desarrollo de la tecnología del PCR y RFLP constituyen metodologías adecuadas para la identificación y tipificación del Mycobacterium avium subsp paratuberculosis (Mptbc), microorganismo que produce paratuberculosis animal y que está relacionado a la Enfermedad de Crohn en humanos. Los objetivos del presente trabajo fueron: Aislar cepas de Mptbc a partir de materia fecal y órganos e identificar M paratuberculosis. Establecer mediante RFLP el patrón genético de las cepas aisladas. Analizar las proteínas celulares y extracelulares expresadas en Mptbc. Se cultivó materia fecal y órganos de ciervos en los medios Herrold yema de huevo, con y sin el agragado de mycobactina, adicionando piruvato y antibiótico, para el aislamiento de Mptbc. Las cepas aisladas fueron identificadas por PCR., y analizadas por RFLP e Inmunoblotting (IB). Se aislaron 12 cepas de Mptbc, 6 de materia fecal y 6 a partir de órganos. Las cepas aisladas se desarrollaron únicamente en el medio Herrold con mycobactina evidenciando su dependencia característica. El análisis por PCR realizado a partir de cepas desarrolladas en el medio de cultivo resultó positivo. Los aislamientos revelaron idéntico patrón genético de RFLP del tipo "A" con la sonda de 217 hb (endonucleasa BstEII y PstI). Con el imunoblotting se detectaron antígenos proteicos de 65 Kda, 42 Kda, 35Kda y 28 Kda, correspondientes a Mptbc de un animal con sintomatología clínica y lesiones histológicas características en órganos. Se identificó un único patrón genético "A" en la poblacion estudiada, se amplifico la secuencia IS900 específica de Mptbc y se identificaronlas proteínas excretadas y contenidas en el soma bacteriano, pero para aumentar la sensibilidad de las pruebas inmunológicas se considera necesario caracterizar mejor los antígenos específicos de Mptbc.