Diseño de marcadores microsatélites para uso en filogeografía de especies de la familia Aeglidae (Decapoda, Anomura)

LORETAN G.; CABRERA J.; RUEDA E.C.; COLLINS P.; GIRI F.

Corrientes

Jornada; II Reunión Argentina de Biología Evolutiva; 2017

Fac. de Cs. Ex. y Nat. y Agrimensura UNNE - ? Instituto de Botánica del Nordeste (UNNE-CONICET)

Introducción: La filogeografía es el campo de estudio relacionado con los principios y procesos que gobiernan la distribución geográfica de linajes de genes, sobre todo aquellos entre y dentro de especies cercanamente relacionadas. Trata de interpretar la extensión y el modo en que los procesos demográficos históricos han dejado marcas evolutivas en la distribución geográfica actual de los caracteres genéticos, utilizando marcadores moleculares. Suelen utilizarse marcadores mitocondriales, ya que tienen características ventajosas como su alta tasa de evolución (sustitución) a nivel de secuencias de nucleótidos, su prácticamente nula recombinación, gran variación intraespecífica, entre otras. Sin embargo, el uso de ADNmt representa problemas que hay que tomar en cuenta: dado que implica un único locus, tiene limitaciones en cuanto a la reconstrucción de historias poblacionales, sobre todo si ese locus ha estado sujeto a selección o algún otro proceso, o si el ADNmt pasó recientemente de una especie a otra por hibridización. Por este motivo, se considera necesario el uso de marcadores complementarios, que puedan representar el genoma de núcleo.El objetivo del trabajo, fue diseñar marcadores microsatélites, que son marcadores nucleares, codominantes, multilocus y tienen alta tasa de evolución (importante para utilizar en análisis intraespecíficos). El diseño de marcadores microsatélites toma gran importancia cuando se trabaja con especies no modelo, en este caso de la familia Aeglidae. Estos crustáceos anomuros dulceacuícolas se distribuyen al sur de América del Sur y constan de más de 70 especies, las cuales, en general, tienen áreas de distribución restringidas, por lo que es muy interesante estudiar su diversificación y evolución.Materiales y Métodos: la búsqueda de microsatélites se realizó sobre la secuenciación parcial del genoma de A. uruguayana, con el programa FullSSR. Se identificaron un total de 18 microsatélites, de los cuales 12 fueron aptos para el diseño de primers y su amplificación. Se extrajo ADN genómico de diez ejemplares por cada una de las cinco especies de la familia Aeglidae: A. uruguayana, A. singularis, A. neuquensis, A. scamosa y A. affinis. Estas muestras se amplificaron con cinco marcadores microsatélites (Au 9, Au 10, Au 12, Au 21 y Au 24) mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los fragmentos obtenidos se corrieron en geles de poliacrilamida al 10% y se obtuvieron los genotipos de los individuos analizados.Resultados y Discusión: se obtuvo el genotipo de los cincuenta ejemplares del género Aegla amplificados con los cinco microsatélites utilizados. Los loci resultaron polimórficos y las bandas resultantes tienen tamaños que varían entre 140 y 280 pares de bases.Conclusiones: los microsatélites diseñados son polimóficos, por lo que serán útiles en estudios filogeográficos en nuevos estudios de la familia Aeglidae, siendo un complemento de la información que nos proveen los marcadores mitocondriales.Agradecimientos: PICT 2014-3502: ?Evidencias de evolución en especies de ambientes continentales de América del sur. La familia Aeglidae (Decapoda-Anomura) como modelo de estudio.? Director: Dr. Federico Giri.