METODOLOGÍAS BIOSEPARATIVAS PARA OBTENCIÓN DE ENZIMAS1- METODOLOGÍAS BIOSEPARATIVAS PARA OBTENCIÓN DE ENZIMAS

PICO, GUILLERMO; NERLI, BIBIANA; FARRUGGIA, BEATRIZ ; ROMANINI, DIANA ; SPELZINI, DARIO ; TUBIO, GISELA

Cordoba

Workshop; 1er Workshop Argentino de Biofísicoquímica de Proteínas; 2011

AAIFQ

La obtención de proteínas para uso farmacológico o alimenticio se realizaba tradicionalmente a partir de productos naturales donde éstas se obtenían en bajas concentraciones y formando parte de mezclas complejas. En la actualidad, y como consecuencia del desarrollo de la Biología Molecular, muchas de ellas son expresadas por microorganismos (bioreactores) para luego aislarse con un variado grado de pureza, el cual condiciona su aplicación final. En ambos casos, cuando la biomolécula de interés debe ser empleada en la industria farmacéutica o alimenticia, es deseable contar con métodos de purificación y concentración que puedan ser aplicados en gran escala, insumiendo cortos períodos de tiempo, sin originar condiciones adversas que puedan desnaturalizar la proteína y disminuir en forma significativa el rendimiento del proceso, con elevada relación rendimiento/costo y que permitan el reciclado de los reactivos empleados en los sucesivos pasos del proceso o bien pudiendo ser descartados al medio ambiente sin impacto sobre el mismo. Desde hace dos décadas, nuestro grupo de investigación se ha consolidado y formalizado en el análisis de la problemática bioseparativa basada en el estudio de las interacciones polímeros de cadena flexible (PCF) ? proteínas. Las técnicas empleadas incluyen calorimetrías diferencial de barrido y de titulación isotérmica, dicroísmo circular, espectroscopía de absorbancia y fluorescencia, viscosimetría, light scattering y polarimetría. Las metodologías bioseparativa desarrolladas en nuestro grupo que emplean PCF son: precipitación con polielectrolitos, adsorción en lecho fluidizado y reparto en sistemas bifásicos acuosos, las que permiten obtener con éxito un producto biológicamente activo. El laboratorio Fisicoquímica Aplicada a la Bioseparación (FAB) forma parte de una red de investigación en el país, una en Corrientes y la otra en Rosario. Ambas se encuentran conformadas por profesores, investigadores pertenecientes a CONICET, estudiantes de posgrado, post-doctorandos y doctorandos, y estudiantes de grado que realizan sus tesinas o pasantías. De FAB-Rosario se desprenden líneas de investigación que aplicando las metodologías bioseparativas anteriormente descriptas, se abocan al estudio particular de enzimas de diferentes orígenes. Concretamente, se han logrado interesantes aplicaciones en la extracción y aislamiento de las siguientes enzimas de origen natural: a partir de frutos de papaya, papaína; de páncreas bovino, lipasa, tripsina, quimotripsina, tripsinógeno y quimotripsinógeno; de estómago bovino, pepsina. Además se han empleado los siguientes cultivos fúngicos: Aspergillus orizae para la obtención de alfa amilasa, Aspergillus niger, Candida rugosa, Trichoderma viride para la bioseparación de xilanasa; cuerpos de inclusión producidos por E. coli para quimosina y Trametes versicolor gran parte de los cuales han sido obtenidos en nuestro laboratorio.Las numerosas publicaciones logradas por los integrantes de nuestro laboratorio así como los convenios y proyectos nacionales e internacionales es el resultado tangible y verificable de la exitosa labor desarrollada.