INVESTIGADORES
TUBIO Gisela
congresos y reuniones científicas
Título:
PRIMER PASO DE UNA ESTRATEGIA DE PURIFICACIÓN DE XILANASA de Thermomyces lanuginosus EMPLEANDO PRECIPITACIÓN DE
Autor/es:
ZIGOLO, M. ANTONELLA; FERRERO, MAXIMILIANO; LOUREIRO, DANA B.; BRAIA, MAURICIO; TUBIO, GISELA; ROMANINI, DIANA
Lugar:
Natal
Reunión:
Conferencia; 27º Congresso Brasileiro de Microbiologia; 2013
Institución organizadora:
Sociedad Brasilera de Microbiologia-FAPESP
Resumen:
La xilanasa (Xyl) es una enzima que aplica principalmente a la industria papelera para el blanqueamiento del papel, en reemplazo de compuestos clorados cuyos productos resultan ser tóxicos, mutágenicos y bioacumulativos. Esta enzima es capaz de romper los enlaces glicosídicos β-1,4 del xilano. El hongo filamentoso Thermomyces lanuginosus es particularmente interesante para la empresa papelera ya que esta especie es capaz de producir xilanasa libre de celulasa. Los polímeros con alta densidad de carga eléctrica forman, bajo ciertas condiciones, complejos insolubles con proteínas los cuales pueden separarse de la solución por decantación o centrifugación. Esta propiedad que poseen los polielectrolitos es la base de un método de aislamiento y purificación de proteínas aplicable directamente sobre cultivos celulares. El objetivo de este trabajo fue diseñar una estrategia de purificación la formación de complejos insolubles entre una xilanasa comercial de T. lanuginosus y poliacrilato (PAA) el cual es un PE aniónico, sintético y de bajo costo. La cepa de fue propagada en medio Agar-Papa-Glucosado a 50°C, durante 5 días. Las esporas fueron suspendidas en agua destilada y su concentración determinada por densidad óptica a 700 nm. Un volumen apropiado de esta suspensión madre de esporas se inoculó, a concentración final de 106 esporas/mL, en medio líquido mínimo conteniendo xilano como única fuente de carbono. El cultivo se incubó durante 7 días, en agitación orbital sin interrupción a 150 rpm y 50°C. Luego se filtró y el sobrenadante fue empleado como fuente natural de Xyl fúngica. La actividad Xyl se determinó por el método de Miller. Las condiciones óptimas de interacción entre la Xyl y el PAA se determinaron por medidas de turbidez (420 nm) a través de barridos de pH, titulaciones turbidimétricas y estudios cinéticos. La mejor condición de precipitación para el complejo Xyl-PAA fue a pH 4,00 y temperatura de 9°C cuando la relación es de 8 mg de PAA por g de Xyl. La redisolución se realizó a 20°C, pH 6,00 en fuerza iónica de 0,5M. Estos datos permitieron diagramar una metodología de purificación de la Xyl a partir del sobrenadante de un cultivo de T. lanuginosus, con el PAA. El rendimiento y factor de purificación obtenidos fueron 31.56% y 12.61, respectivamente, los cuales pueden considerarse excelentes resultados para un único y primer paso de purificación realizado directamente sobre un cultivo sin previo clarificado.