INVESTIGADORES
TUBIO Gisela
congresos y reuniones científicas
Título:
ANALISIS FISICOQUÍMICO DEL PERFIL DE PRECIPITACIÓN DE AFINIDAD DE CUTINASA EMPLEANDO POLIETILENIMINA SOBRE EL MEDIO DE CULTIVO
Autor/es:
SUBILS, TOMÁS; GALLUCCI, GEORGINA; TUBIO, GISELA; SALAZAR, ORIANA; LIENQUEO, MARIA ELENA; ROMANINI, DIANA
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; XVIII CONGRESO ARGENTINO DE FÍSICOQUÍMICA Y QUÍMICA INORGÁNICA; 2013
Institución organizadora:
Docentes FCByF UNR
Resumen:
Introducción: La optimización de las enzimas para propósitos industriales es en la actualidad un objetivo en crecimiento en bioingeniería de proteínas. La cutinasa (EC 3.1.1.74) es una enzima que cataliza la hidrólisis de la cutina, un componente polimérico estructural de la cutícula de las plantas. Estas enzimas muestran propiedades catalíticas de esterasas y lipasas, debido a que pueden hidrolizar ésteres solubles y riacilgliceroles. Esta versatilidad ha promovido su aplicación en áreas como la industria de alimentos,detergentes, producción de biodiesel, degradación enzimática de sustancias tóxicas y polímeros sintéticos. La precipitación de afinidad es una metodología muy económica, simple y rápida de recuperar enzimas desde su fuente natural, pero sólo es útil como primer paso extractivo. Para lograr una óptima purificación que pueda ser transferida a la industria es necesario combinarla con otras metodologías que permitan obtener a la enzima libre de sus contaminantes. Una metodología que, por sus características, podría combinarse satisfactoriamente es la cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC). Objetivos: En este proyecto nos hemos propuesto optimizar las variables fisicoquímicas del medio que condicionan la formación de un complejo entre cutinasa y el polímero polietilenimina (PEI). Dicho complejo podrá someterse en un segundo paso de purificación a una (HIC) para optimizar la recuperación y purificación de cutinasa. Resultados: La cutinasa de Fusarium solani expresada en E. coli se obtuvo en el medio de cultivo de acuerdo al protocolo de referencia [1]. En primer lugar se realizaron curvas de titulación de cutinasa con PEI y los correspondientes diagramas de fase (turbidez vs pH) a diferentes relaciones molares. El rango de precipitación se obtuvo entre pHs de 5 a 9. Los ensayos de actividad enzimática de la cutinasa formando parte del complejo insoluble con PEI demuestran que dicho polímero mantiene la actividad aun en altas concentraciones del mismo. La cinética de formación del complejo insoluble se ensayó a dos temperaturas (25 y 40°C) y se observó que el tiempo de formación del complejo es de 2 minutos a ambas temperaturas. La formación del complejo insoluble cutinasa-PEI se ensayó a 2 pHs: 7,0 y 8,5, observándose a éste último una mayor turbidez para la misma relación cultivo-PEI. Conclusiones: Las condiciones de formación de complejos insolubles cutinasa-PEI permitieron obtener en un único paso un rendimiento de precipitación del 19% y un factor de purificación de 1,6. Si bien los resultados son satisfactorios, la concentración remanente de cutinasa no precipitada puede someterse a un nuevo paso de precipitación. [1] M. T. Neves-Petersen y col. Journal of Biotechnology 87 (2001) 225–254.