INVESTIGADORES
TUBIO Gisela
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis del efecto de alginato, maltosa y CaCl2 sobre la actividad amilasa de Aspergillus oryzae para su ulterior extracción empleando sistemas bifásicos acuosos
Autor/es:
MARINA, JORGELINA; ROMANINI, DIANA; TUBIO, GISELA
Lugar:
Casilda
Reunión:
Congreso; XIV Congreso XXXII Reunión Anual. Sociedad de Biología de Rosario; 2012
Resumen:
La alfa-amilasa (EC 3.2.1.1) es una enzima que cataliza la hidrólisis de los enlaces alfa 1,4-glicosidicos del almidón, quedando como productos de reacción poli- y oligosacáridos de diferente longitud, alfa-dextrinas y el disacárido maltosa. Las amilasas son enzimas que pueden tener orígenes diversos tales como, fúngicos, bacterianos, vegetal y animal. En la actualidad el Aspergillus oryzae es el microorganismo más ampliamente utilizado como fuente productora de a-amilasa de origen fúngico. La alfa-amilasa de Aspergillus oryzae es una metaloproteina formada por una cadena polipeptídica que consta de 478 residuos. La estructura primaria se ha determinado mediante secuenciación directa de la cadena polipeptídica y también por deducción a partir de la secuencia de nucleotídica del gen que codifica para la proteína. La molécula puede contener hasta 10 iones Ca2+, aunque solamente uno de ellos no es disociable, siendo esencial para mantener la actividad catalítica y para estabilizar la estructura tridimensional de la proteína. La α-amilasa puede ser utilizada como sustituto de los emulsionantes habitualmente utilizados por la industria panadera (ésteres del ácido diacetil tartárico, estearoil lactilato sódico, monoglicéridos), se encuentra presente en la composición de muchos de los detergentes que se comercializan, en la fabricación de productos de panificacion, en la maduración de frutas, etc. Esta enzima es posible extraerla de su fuente natural mediante extracción líquido-líquido empleando sistemas bifásicos acuosos (ESBA). Los sistemas bifásicos acuosos formados por un polímero y una sal son particularmente interesantes, debido a su bajo impacto medioambiental y al bajo costo del sistema. La incorporación de un ligando libre que pueda interaccionar específicamente con la proteína que se desea aislar formando un complejo ha derivado en un bioproceso denominado reparto de afinidad. Posteriormente, la precipitación del complejo ligando-proteína permite aislar la proteína de interés con mayor rendimiento y pureza. El diseño de la presente metodología extractiva se basa en ESBA de afinidad, empleando como macroligando alginato el cual presenta una alta afinidad por la enzima alfa amilasa.  Añadida alfa-amilasa y, luego de alcanzado el equilibrio de reparto, en cada fase se cuantifica la proteína a través de las medidas de su actividad catalítica, para calcular el coeficiente de reparto en los diversos sistemas; como así también se determina la concentración de alginato para calcular el cociente de reparto del mismo. Dado que el alginato forma un precipitado insoluble con calcio, se agrega en cada fase CaCl2 para precipitar el complejo alginato-amilasa-Calcio. Posteriormente se centrifuga y el pellet obtenido es resuspendido con una solución de maltosa para favorecer la redisolución del complejo. La maltosa presenta mayor afinidad por amilasa, de este modo la enzima se encontrará en solución y el alginato continuará precipitado con el calcio. Para determinar el rendimiento del proceso es necesario determinar actividad amilasa en cada etapa.