OPTIMIZACIÓN DE LA EXTRACCION DE TRIPSINA PANCREATICA BOVINA POR SISTEMAS BIFASICOS ACUOSOS, EMPLEANDO METODOLOGÍA DE SUPERFICIE DE RESPUESTA

PEREZ, ROCIO LAURA; PICO, GUILLERMO; NERLI, BIBIANA; BELLUZZO, SOLEDAD; TUBIO, GISELA

Cordoba

Congreso; XVII Congreso Argentino de Fisicoquimica y Quimica Inorganica; 2011

AAIFQ

Los procedimientos descriptos para la purificación de enzimas, incluyen diversas etapas en las que usualmente se logra un factor de purificación (FP) parcial, con altos consumos de tiempo y bajo rendimiento (R) final. En la actualidad el empleo de sistemas bifásicos acuosos (SBAs) ha constituido una alternativa para la separación y purificación de mezclas de proteínas a partir de extractos naturales debido a las múltiples ventajas que ofrecen. La extracción y purificación de enzimas pancreáticas, como Tripsina (TRP) involucrada en numerosos procesos biológicos y aplicaciones industriales, han sido objeto de intenso estudio. Previamente en nuestro laboratorio se determinaron las variables que intervienen en la obtención de TRP durante el proceso de reparto de homogenado de páncreas bovino (HP), cuando se emplean SBAs formados por polietilenglicol 3350 y citrato de sodio a pH 5,20 (PEG3350/NaCit). En esta etapa inicial se efectuó el cribado mediante un diseño experimental utilizando el programa estadístico Design-Expert 6.0.10 donde se seleccionaron 3 variables de las 6 estudiadas. El objetivo de la presente investigación fue optimizar las variables significativas: concentración de NaCl (ccNaCl), relación de volúmenes de fases superior respecto de la inferior (Vsup/Vinf) y concentración de HP sembrado en el sistema (ccHP), empleando metodología de superficie de respuesta por medio de un diseño central compuesto. Se midió actividad de TRP (frente a BAPNA) y concentración de proteínas totales por el método de Warburg en todos los SBAs en los cuales se ensayó el reparto de HP activado. Se determinaron los coeficientes de reparto de proteínas totales y de TRP (KrTRP); R y FP en cada fase de los SBAs ensayados. Todos los experimentos fueron realizados por triplicado y procesados por medio de análisis de la variancia (ANOVA), midiendo las diferencias estadísticamente significativas aceptables a un nivel de 95 % de confianza (P˂0.05). La respuesta óptima obtenida para ensayar el reparto de HP de acuerdo al modelo fue   para un sistema PEG3350/NaCit con 2.95 %P/P de NaCl, Vsup/Vinf 5.5 y ccHP sembrada 7.5%, lográndose un R superior al 92 %, FP: 2 y una deseabilidad de 0,92. De los gráficos de superficie para cada fase de los SBA se puede deducir, que el aumento de la concentración de NaCl y la relación Vsup/Vinf frente a la disminución de la ccHP constituye una herramienta útil que puede direccionar aun más el reparto de la proteasa. Sin embargo los intervalos de trabajo se encuentran acotados por las condiciones experimentales en las que dichos SBA pueden llevarse a cabo. Los resultados obtenidos permiten concluir, que la metodología empleada es adecuada para lograr la optimización de la extracción de TRP pancreática bovina por sistemas PEG3350/NaCit, logrando maximizar el rendimiento en períodos breves de tiempo, respecto del proceso de optimización mediante un desarrollo univariado.