EXTRACCIÓN DE PROTEÍNAS PANCREÁTICAS BOVINAS EMPLEANDO REPARTO DE AFINIDAD CON COLORANTES TRIAZÍNICOS LIBRES

ROCHA, MARIA VICTORIA; NERLI, BIBIANA; TUBIO, GISELA

Rosario

Simposio; 1er Simposio Argentino de los Procesos Biotecnológicos (SAPROBIO); 2010

Laboratorio de Fisicoquimica Aplicada a Bioseparación - Rosario - UNR

La biotecnología es una importante disciplina científica que ha cobrado interés en los últimos años. En la actualidad, es considerada un enfoque multidisciplinario que involucra varias ciencias y tecnologías. En el área aplicada, la biotecnología industrial se emplea con el fin de reducir los costos, aumentar la calidad de los productos, optimizar los procesos y su seguimiento, mejorar la higiene y seguridad cumpliendo siempre con la legislación ambiental. Los sistemas bifásicos acuosos (SBAs) han sido utilizados por algo más de tres décadas como herramienta de separación y purificación de biomateriales a nivel industrial con ciertas ventajas respecto a los métodos tradicionales como ser: bajo costo, simplicidad, rapidez en la separación, la posibilidad de aplicarse a macroescala, etc. Una variante de esta metodología, denominada reparto de afinidad, consiste en incorporar al SBA un ligando (L) específico con afinidad por la proteína a aislar, de modo que el reparto en el SBA esté direccionado hacia una de las fases, particularmente que induzca el desplazamiento de la proteína de interés (y no de las restantes) hacia la fase donde dicho ligando se concentra. En este último caso, el cambio en el coeficiente de reparto de las moléculas (Kr) será influenciado por el número de L por molécula, la concentración del mismo y sus características de unión a la proteína. Los L más frecuentemente usados en distintos repartos de afinidad pertenecen al grupo de los colorantes derivados de triazina, como el reactivo amarillo 2 (RY2), que presentan analogía estructural con ciertas coenzimas y pueden interaccionar específicamente con gran número de enzimas. Dentro de las proteínas que presentan la propiedad de unir colorantes triazínicos, las serin proteasas tripsina (TRP) y quimotripsina (QTRP) resultan especialmente interesantes, por su amplia utilización a nivel industrial en el campo farmacológico, textil y fabricación de cueros. El objetivo de este trabajo fue caracterizar el comportamiento de reparto del colorante triazínico RY2 y evaluar su aplicabilidad como ligando libre en el reparto de afinidad,  para el aislamiento de las proteasas pancreáticas Tripsina y Quimotripsina.