Purificación de quimosina recombinante empleando reparto en sistemas bifásicos acuosos de maltodextrina - polioxido de propileno y etileno

GEORGINA REH; GISELA TUBIO; DARIO SPELZINI; BEATRIZ FARRUGGIA; GUILLERMO PICO

Rosario, Argentina

Congreso; V Congreso XXIII Reunión Anual. Sociedad de Biología de Rosario; 2003

Sociedad de Biología de Rosario

La quimosina es una proteína del cuajo, de alto valor comercial, que se emplea en la fabricación del queso. La más utilizada en nuestro país en fábricas de primer nivel es la quimosina recombinante expresada en Escherichia Coli recuperada como cuerpos de inclusión sin actividad (proquimosina), de donde debe ser extraída mediante un tratamiento con urea, posterior renaturalización oxidativa y concentrada, lo que produce una disminución del rendimiento del proceso de obtención. Los sistemas bifásicos acuosos (SBA) son un medio que protegen a las proteínas, aumentando su estabilidad termodinámica. En este trabajo se aplicó un sistema bifásico acuoso (SBA) formado por poli óxido de etileno (80%) y propileno (20%) (POEP)- maltodextrina para repartir los cuerpos de inclusión ya tratados con urea, inducir la trasferencia de la proteína a la fase POEP para aislarla de las impurezas, producir su renaturalización oxidativa, proceder a obtener un concentrado, realizando todo el proceso en una sola operación. La mayoría de la quimosina queda en la fase POEP, este polímero cuando se lo calienta a 40º C precipita quedando la proteína en el sobrenadante prácticamente en un medio libre de polímero recuperandose el POEP que puede ser reciclado al proceso y la obtención de la proteína en solución concentrada. La constante de reparto de la quimosina recombinante en el SBA estudiado tiene un valor de 3 mientras que la constante de reparto de la proquimosina que proviene de los cuerpos de inclusión tiene un valor de 10 de manera que el recupero en este medio SBA es altamente satisfactorio. El rendimiento del proceso total es similar al rendimiento del proceso usualmente empleado (48%) aunque hemos logrado realizar el proceso en una única etapa y se podrían emplear otros SBA con mejores rendimientos. Además el empleo del SBA tienen la ventaja de ser muy económico, permiten recuperar y reciclar los polímeros empleados evitando de esta manera el empleo de resinas de intercambio iónico y membranas de concentración.