Enfoque polifásico para la identificación de Alternaria spp. aisladas de alimentos

DA CRUZ CABRAL L., NIELSEN K., STENGLEIN S., FERNÁNDEZ-PINTO V. & PATRIARCA A.

Congreso; XII Congresso Latinoamericano de Microbiologia e Higiene de Alimentos; 2014

Alternaria es un contaminantefrecuente de cultivos, capaz de producir micotoxinas. Abarca una grandiversidad morfológica y ha habido muchos intentos para organizarlo ensubgéneros. La clasificación de Simmons (2007) divide el género en 14grupos-especie (g-e) según su patrón de esporulación en condicionesestandarizadas. Debido a la plasticidad de estos patrones entre especies, esfundamental realizar un enfoque polifásico para lograr una identificaciónprecisa. Se identificaron 45 cepas de Alternaria aisladas de alimentos (14 detomate, 14 de pimiento, 15 de trigo y 2 de arándanos) según Simmons (2007). Ladeterminación de metabolitos secundarios se realizó en DRYES (14 días a 25°C),seguido de extracción a micro escala, según Andersen y col. (2009). Ladetección se realizó en HPLC-DAD acoplado a EM ESI-TOF. Se amplificó una regióndel gen de endopoligalacturonasa utilizando cebadores específicos (endoPG3 yendoPG2b) y se secuenció el fragmento amplificado. Los aislamientos se identificaronpor morfología como pertenecientes al g-e A. tenuissima (29/45) y A.arborescens (11/45). El resto de las cepas presentó características intermediasentre estos grupos y el g-e A. alternata, y se clasificaron como Alternariaspp. Por análisis del perfil de producción de metabolitos secundarios no seencontró ningún compuesto representativo de grupo, presentando todos losaislamientos perfiles superpuestos. El estudio de las secuencias del fragmentode endoPG tampoco mostró característicasdistintivas dentro de cada grupo. La comparación de las secuencias con bases dedatos (BLAST-NCBI) mostró superposición y alto porcentaje de similitud (>90%) con especies dentro de estos tres g-e. La correcta identificación dehongos a nivel de especie es importante ya que hace posible predecir laproducción de metabolitos secundarios y su comportamiento fisiológico. Desde elpunto de vista de la seguridad alimentaria, el conocimiento del patógenopermite evaluar el riesgo y desarrollar estrategias de prevención. El enfoquepolifásico utilizado es una estrategia abarcativa que incluye diferentesaspectos de la fisiología del hongo en estudio. Las herramientas usadas en estetrabajo no fueron suficientes para segregar las diferentes especies deAlternaria de esporas pequeñas actualmente reconocidas (Simmons 2007). Lataxonomía de Alternaria se encuentra actualmente en revisión.