Extracción de dna a partir de cortes histológicos de pejerrey (Odontesthes bonariensis)

GABRIELA C. LÓPEZ; ANA MARÍA PAHÍ-ROSERO; GUSTAVO M. SOMOZA

Rosario

Congreso; XXIV Congreso Argentino de Histotecnología; 2019

Sociedad Argentina de Histotecnología

El pejerrey (Odontesthes bonariensis) es una especie con alto valor económico, tanto por su valor comercial, como por su interés deportivo o recreativo y es considerado como uno de los peces emblemáticos de la ictiofauna de agua dulce de la Argentina. Posee un sistema de determinación sexual por temperatura (TSD) yaque la temperatura determina el sexo dentro de las 5 primeras semanas post eclosión. Sin embargo, estudios recientes han demostrado la presencia de un gen, Amhy (Y-chromosome-linked anti-Müllerian hormone) que determina la diferenciación de un primordio gonadal a testículo, siendo un ejemplo de la interacción entre un sistema de determinación sexual genética (GSD) y un TSD (Yamamoto et al., 2014). El objetivo de este trabajo fue desarrollar una técnica económica que permita la determinación del sexo genotípico por PCR a partir de la extracción de DNA obtenido de cortes histológicos para evaluar las inversiones sexuales en muestras ya embebidas en parafina. Dichos cortes, se obtuvieron de muestras de ejemplares adultos (gónadas, hígado, bazo e intestino) fijadas en formol al 4% en buffer fosfato pH 7,4 y en líquido de Bouin e incluidos en parafina (protocolo puesto a punto en nuestro laboratorio), los cortes se realizaron en un microtomo Leica 2125 RT y se recolectaron en tubos del tipo Eppendorff de 1,5 ml. El grosor de los mismos varió entre 10µ a 20µ, y la cantidad de cortes entre 10 a 35 que fueron sometidos a procesos de desparafinación (Shi et al., 2002). La extracción de DNA genómico se realizó de acuerdo con la metodología descripta por Aljanabi & Martínez 1997 mediante el método de lisis alcalina (NaOH 50mM y Tris-HCL 1M) y la determinación del sexo genotípico mediante la utilización de primers específicos que permiten amplificar el gen. Se pudo confirmar la presencia de Amhy a partir de muestras incluidas en parafina y obtener datos preliminares relevantes a partir de muestras en los que no se ha podido realizar la extracción de DNA con anterioridad.