INVESTIGADORES
SOMOZA Gustavo Manuel
congresos y reuniones científicas
Título:
Producción de la hormona de crecimiento de pejerrey en cultivos bacterianos.
Autor/es:
SCIARA, A.; SOMOZA, G.M.; ARRANZ, S.
Lugar:
Mar del Plata. Argentina
Reunión:
Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004
Institución organizadora:
SAIC
Resumen:
Produccióan de la Hormona de Crecimiento de Pejerrey en Cultivos Bacterianos. Aplicaciones en Piscicultura. Sciara, Andrés, Somoza, Gustavo Manuel & Arranz, Silvia. Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario (IBR). Rosario. Santa Fé. Laboratorio de Ictiofisiología y Acuicultura, IIB-INTECH. Chascomús.. Provincia de Buenos Aires. Argentina. El pejerrey bonaerense, Odontesthes bonariensis, es un pez autóctono cuya calidad de carne y mercados de venta lo hacen interesante para su explotación comercial. Si bien se ha trabajado en el cultivo del pejerrey, aún no se han obtenido tasas de crecimiento adecuadas para su cultivo intensivo. En numerosas especies de peces se ha demostrado que el suplemento de la alimentación con Hormona de Crecimiento (GH) mincrementa la velocidad de crecimiento de los mismos. El objetivo del siguiente trabajo es producir GH de pejerrey recombinante (pjGHr) en sistemas bacterianos para su uso en acuicultura y generar ensayos in vitro para la evaluación de su actividad. Para ello se obtuvo por técnicas de RT-PCR la secuencia que codifica para la proteína madura de pjGH y subclonó en un vector pET-24 transformado para producción de proteínas recombinantes con alta eficiencia induciendo con lactosa. Mediante lisis celular en French Press y centrifugación se obtuvo la proteína en cuerpos de inclusión (CI), ésta representa un 26% del peso seco de las células. El rendimiento alcanzado es de aproximadamente 0,5 gs. De pjGH cada litro de cultivo. Por SDS-PAGE y análisis densitométrico  se determinó que los CI tenían un 78% de pureza, aumentando a un 83% luego del lavado. Con el propósito de tener herramientas para evaluar el nivel de GH en plasma (ELISA) se generaron anticuerpos contra pjGH (ACGH). Análisis de extractos de hipófisis por Western-Blot sumado a inmunistoquímica en corte de hipofisis muestran la especificidad de los acGH. Se puso a punto una PCR semicuantitativa para evaluar la actividad biológica de la pjGH midiendo la expresión del factor de crecimiento IGF-I en cultivos primarios de hepatocitos de pejerrey. Logramos obtener la pjGHr con altos rendimientos y pureza sin métodos costosos de purificación. Se generaron además herramientas para la detección de la actividad de la pjGHr in vitro y su concentración plasmática.