Caracterización de una cepa dam de Salmonella enterica serovar Enteriditis.

SARNACKI S. H., GIACOMODONATO M. N., SISTI F. B., SORDELLI D. O., CERQUETTI M. C.

Buenos Aires, Argentina.

Congreso; XVII Congreso latinoamericano de Microbiología y X Congreso Argentino de Microbiología.; 2004

Asociación Argentina de Microbiología (AAM) y Asociación Latinoamericana de Microbiología (ALAM)

&lt;!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman"; mso-ansi-language:EN-US;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --&gt; La proteína Dam (ADN-adenina-metiltransferasa) actúa como un regulador global de la expresión de genes y en consecuencia afecta una amplia gama de funciones celulares en bacterias tales como E. coli o Salmonella spp.  En el presente trabajo se caracteriza una mutante dam de S. enterica serov. Enteritidis obtenida en nuestro laboratorio por transposición. La inserción dam-231::Tn10dTet confiere un fenotipo termosensible para la proteína Dam dada la ausencia de los últimos 10 aminoácidos. El estado de metilación de la mutante SD1 se determinó mediante la digestión del ADN genómico con tres enzimas de restricción: Sau 3AI, MboI y DpnI. Se observó que la cepa SD1 presenta ADN metilado y no metilado. Este patrón de metilación revirtió al ser complementada la cepa con el plásmido pTP166 que porta el gen salvaje de la proteina Dam. Experimentos in vitro con la cepa SD1 mostraron que tanto la filamentación como la sensibilidad a la 2-AMP (dos características de las mutantes dam) se incrementan a 37 ºC sugiriendo que la mutante presenta una proteina Dam termosensible. Ratones Balb/c de 8 semanas de vida se inocularon vía oral, intragástrica (i.g.) e intraperitonealmente (i.p.) con distintas dosis de la cepa SD1. Los resultados mostraron que la mutante es altamente inocua (DL50 i.p. >105 UFC y DL50 i.g. > 109 UFC), aproximadamente 10.000 veces más atenuada que la cepa parental. Se estudió además la sensibilidad de la mutante a algunos componentes de la inmunidad innata. Se observó que la cepa SD1 es sensible al deoxicolato y a las sales biliares. Con respecto al peroxido de hidrógeno se encontró que la mutante SD1 es más sensible que la cepa salvaje (CIM = 27 mM vs. 55 mM respectivamente). La mutante SD1, al igual que las mutantes dam descriptas hasta el momento, muestra una escasa colonización de los órganos blanco como placas de Peyer, bazo e hígado, lo que contribuiría a su elevada atenuación.  Sin embargo induce una significativa protección (p < 0.05) de los animales inmunizados y desafiados con la cepa salvaje respecto de los animales controles (no inmunizados). Curiosamente, el análisis del LPS de la mutante SD1 mediante SDS-PAGE teñido con plata mostró ausencia del antígeno somático O.  La elevada atenuación encontrada y el fenotipo termosensible de proteína Dam hacen de la mutante SD1 de S. enterica serov. Enteritidis una promisoria herramienta para el estudio de la regulación de la expresión de genes bacterianos in vivo.