Caracterización de la producción de la adhesina curli y formación de biopelículas en diversos aislamientos de Escherichia coli O157:H7

ADRIÁN GONZALES MACHUCA; JIMENA GENTILUOMO; ADRIANA SUCARI; LILIANA FERNANDEZ CANIGIA; SEBASTIAN HERNÁN SARNACKI; CECILIA QUIROGA

CABA

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM) - 2019; 2019

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

INTRODUCCIÓN{Escherichia coli} enterohemorrágica (EHEC) O157:H7 es el principal agenteresponsable de colitis hemorrágica y del síndrome urémico hemolítico. EHECposee diversas adhesinas que intervienen en el proceso de colonización, como sercurli, la cual está asociada a la formación de biopelículas además de estarimplicada en la adhesión celular, invasión y activación del sistema inmune. Curlise encuentra codificada en dos operones, {csgBAC}y {csgDEFG}, siendo {csgD}su principal regulador. A la fecha existen pocos estudios que evalúan lasintesis de curli y formación de biopelículas en diversos aislamientos de EHEC O157:H7.OBJETIVOEl objetivo de este trabajo fue estudiar la capacidad de síntesis de la adhesina curliy de formación de biopelículas en diversos aislamientos de EHEC procedentes demuestras clínicas o de alimentos.MATERIALES Y MÉTODOSSe emplearon 2aislamientos clínicos (CQ17 y CQ148) procedentes de hospitales de la ciudad deBuenos Aires, 4 de alimentos contaminados (CQ144, CQ145, CQ146 y CQ147) juntocon las cepas control {E. coli}enteroagregativa (CQ100) y {E. coli} MG1655. Se determinó el morfotipo demacrocolonias y la producción de curli en medio LB agar suplementado con rojo congoy {coomassie brillant blue} a diferentestemperaturas (28 y 37°C)y en ausencia de NaCl durante 48 y 120 h. Se cuantificó la capacidad de adherenciade las distintas cepas cultivadas a 28°C y 37°C por 48 y 120 h sobre poliestireno seguidode la tinción con cristal violeta. RT-PCR. Se extrajo el ARNtotal de las cepas con Trizol, se lo trató con DNAse I-RNAse free, y sesintetizó el cDNA con la enzima M-MLV RT y un {primer}específico para el gen {csgD}. Luego seamplificó dicho gen con {primers}específicos por PCR.RESULTADOSEl análisis de lasíntesis de curli mediante el ensayo de rojo congo mostró una gran variabilidadentre las distintas cepas. Las cepas CQ146 y MG1655 crecidas a 28°C a partir de las 48 h mostraronel morfotipo {rdar} característico de laproducción de biopelículas, mientras que a 37°C no se evidenció dicha producción; lascepas CQ17, CQ148, CQ144, CQ145 y CQ147 mostraron un morfotipo {saw} aambas temperaturas, que refleja la no producción de biopelículas. Por otrolado, sólo el aislamiento CQ146 mostró la capacidad de adherencia (indicador dela producción de biopelícula) a 28°Ctanto a 48 como a 120h. CQ17, CQ148, CQ144, CQ145 y CQ147 no mostraron adherencia.Los ensayos de expresión del gen regulador {csgD} enCQ146 mostraron que se encuentra activo.CONCLUSIÓNLos parámetros decrecimiento, tiempo y temperatura, contemplados en los ensayos realizadosresultaron ser factores únicos de cada aislamiento EHEC O157:H7 que afectan laadherencia al poliestireno y síntesis de curli. El análisis comparativo entre estascaracterísticas sugiere que existe una gran variablidad en la producción debiopelículas incluso dentro de un mismo virotipo. De esta forma, lacolonización/infección por estas bacterias en un hospedador sería inherente acada aislamiento.