INVESTIGADORES
SARNACKI Sebastian Hernan
congresos y reuniones científicas
Título:
Participación de la metilación del ADN en la regulación de la expresión de la Isla de Patogenicidad-5 de Salmonella Typhimurium.
Autor/es:
NOTO LLANA, MARIÁNGELES; SARNACKI, SEBASTIÁN H.; BUZZOLA, M. FERNANDA; CERQUETTI, M CRISTINA; GIACOMODONATO, MÓNICA N.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2013); 2013
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología (AAM)
Resumen:
La metilación del ADN por la enzima ADN adenina metilasa (Dam) cumple, entre otros, un papel fundamental en la regulación de la expresión de factores de virulencia de una amplia variedad de patógenos, incluyendo Salmonella spp. SopB es una inositol fosfato fosfatasa que se encuentra codificada en la Isla de Patogenicidad 5 de Salmonella (SPI-5) y participa en eventos tempranos y tardíos de la infección. En este trabajo se analizó la participación de la metilación por la enzima Dam en la regulación de la expresión y translocación de SopB in vitro, en cultivo celular e in vivo. Para llevar a cabo tal objetivo, se obtuvo y caracterizó una mutante dam denominada STD2796 (sopB::3xFLAG dam-230 zge-6313::Tn10dCmR) que posee el gen sopB marcado con el epitope FLAG. Dicha cepa se complementó con un plásmido que porta el gen dam salvaje y se denominó STD2796/pIZ833. Posteriormente, se analizó el efecto de la ausencia de metilación por Dam sobre la síntesis y secreción de SopB, bajo condiciones de cultivo que imitan el ambiente intestinal y bajo condiciones que imitan el ambiente intracelular. La expresión de SopB se determinó in vitro analizando diferentes fracciones del cultivo bacteriano. El sobrenadante del cultivo y el pellet se utilizaron para analizar las proteínas secretadas y asociadas a la bacteria, respectivamente. El análisis mediante Western blot reveló una disminución en la expresión y secreción de SopB en las mutantes dam de Salmonella Typhimurium respecto de las cepas salvaje y complementada, bajo condiciones que imitan el ambiente intestinal. Mientras que no se logró detectar expresión y secreción de SopB en la mutante dam bajo condiciones que reproducen el ambiente intracelular. Resultados comparables se obtuvieron cuando se analizó la expresión del gen sopB en dichas mutantes mediante PCR en tiempo real. Por otro lado, los experimentos en cultivo celular y en el modelo murino demostraron la presencia de SopB en bacterias dam intracelulares a las 24 horas luego de la infección de células HEp-2 y en el ganglio linfático mesentérico murino aunque a niveles significativamente menores (p<0,05) respecto de la cepa salvaje. Sin embargo, sólo se logró detectar la translocación de SopB al citosol de dichas células en la cepa salvaje de Salmonella Typhimurium. En resumen, en este trabajo se demuestra que la metilación por Dam participa en la regulación de la síntesis y secreción de efectores que se encuentran en la SPI-5, como ser SopB.
