Aislamiento y caracterización de bacterias solubilizadoras de fosfato de Lotus tenuis en condiciones salino-alcalinas

CUMPA VELÁZQUEZ, LIZ; MAZZA, EMANUEL; CASTAGNO, LUIS NAZARENO; SANNAZZARO, ANALIA INÉS; ESTRELLA, MARIA JULIA

Rosario

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM; 2016

Asociación Argentina de Microbiologia

Introducción. La Región de la Pampa Deprimida de la Cuenca del Río Salado es la zona de cría vacuna más importante de la Argentina, con pastizales naturales que constituyen su principal recurso forrajero, sin embargo sus suelos se caracterizan por ser pobres en nutrientes y estar sujetos a ciclos periódicos de sequía y anegamiento (Berasategui & Barberis, 1982), por ello una alternativa para incrementar su productividad y calidad forrajera, es la incorporación de leguminosas que toleren a dichas condiciones. Una leguminosa de adaptación exitosa a la Pampa Deprimida, es Lotus tenuis (ex Lotus glaber; Kirkbride, 2006), que además de ser un recurso de alto valor nutricional, tiene la habilidad de establecer interacciones con microorganismos benéficos que pueden ser aplicados como biofertilizantes. El estudio y la aplicación de este tipo de microorganismos que además se desarrollen en suelos restrictivos, es un factor clave en la búsqueda de herramientas sustentables y eficientes para mejorar la producción forrajera por ello el objetivo del presente estudio es aislar y caracterizar bacterias solubilizadoras de fosfato (BSF) tolerantes a condiciones salino alcalinas, a partir de la rizosfera de Lotus tenuis.Materiales y Métodos. Se colectaron plantas de Lotus tenuis de suelos de 3 localidades de la Pampa Deprimida del Salado: Manantiales, Castelli y Punta Indio cuyas características cumplen con las condiciones de salinidad y alcalinidad requeridas para el presente estudio (pH entre 8,09 y 9,70; CE entre 140,7 y 519µS). De la rizósfera de dichas plantas se obtuvieron BSF usando el medio selectivo N-BRIP con nistatina como antifúngico. A dichos aislamientos se les evaluó la capacidad solubilizadora de fosfato en condiciones salino-alcalinas utilizando el medio N-BRIP suplementado con Na2CO3 200mM y ajustado a diferentes condiciones de pH (8, 9 y 10). Por otra parte, se utilizó la técnica Box-PCR para obtener perfiles de huellas genómicas con el fin de analizar la diversidad genética de los aislamientos de BSF y seleccionar las cepas no redundantes. La identificación taxonómica de las BSF se realizó mediante la amplificación, secuenciación y análisis filogenético del gen que codifica el ARNr 16S.Resultados. Se obtuvo un total de 231 aislamientos de BSF de los cuales 57,14% mostraron actividad solubilizadora a pH 9, y 20,34% a pH10. Estos resultados sugieren que la mayoría de los aislamientos resultaron eficientes para solubilizar fosfato bajo las condiciones de estrés evaluadas y que la estrategia de búsqueda de cepas que están adaptadas naturalmente a condiciones salino-alcalinas resultó efectiva. El análsis de similitud de los perfiles Box sugiere que existe una gran diversidad genética entre los aislamientos que solubilizan fosfato bajo condiciones salino-alcalinas. Por otra parte el análisis filogenético reveló que los aislamientos que solubilizan fosfato en las condiciones más extremas (Na2CO3 200mM, pH10) pertenecen a los géneros Serratia, Rahnella, Enterobacter, Klebsiella y Pantoea. Conclusiones. Se aisló una gran diversidad de bacterias que solubilizan fosfato en condiciones de alcalinidad extrema. Esta colección constituirá el punto de partida para evaluar y seleccionar bacterias que promuevan el crecimiento de L tenuis bajo condiciones de estrés salino-alcalino y además para estudiar los mecanismos de adaptación y tolerancia a dicho estrés.