INVESTIGADORES
SANNAZZARO Analia Ines
congresos y reuniones científicas
Título:
VARIACIÓN EN EL COMPORTAMIENTO EN VIDA LIBRE Y EN SIMBIOSIS DE MUTANTES DE RIZOBIOS, SENSIBLES A SALINIDAD QUE INTERACCIONAN CON Lotus tenuis
Autor/es:
VILLA, ALEJANDRO; CASTAGNO, LUIS NAZARENO; UCHIYA, PATRICIA; SANNAZZARO, ANALIA INÉS; ESTRELLA, MARIA JULIA
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología; 2013
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
ntroducción: El aumento de la superficie sembrada con cereales y oleaginosas, ha limitado la producción de forraje a zonas restrictivas como los bajos salino-alcalinos de la Pampa Deprimida del Salado. El cultivo de Lotus tenuis en esta región aporta valor nutricional a las pasturas a través de la interacción simbiótica con bacterias fijadoras de nitrógeno (Estrella et al, 2009; Sannazzaro et al, 2011). Estas bacterias se utilizan en el campo como biofertilizantes, sin embargo, su éxito está supeditado al uso de cepas eficientes y competitivas en los ambientes donde van a ser aplicados. En ese sentido resulta clave conocer los mecanismos involucrados en su adaptación y supervivencia en condiciones de salinidad. Objetivo: Obtener rizobios mutantes en genes relacionados a la tolerancia a salinidad y caracterizar su comportamiento en vida libre y en simbiosis con Lotus tenuis. Materiales y métodos: Mutagénesis al azar mediante conjugación biparental. Se realizaron conjugaciones entre una cepa de E. coli portadora del mini-Tn5 y una cepa de Mesorhizobium sp. BSA151 tolerante a NaCl. Detección de la inserción del mini-Tn5 en los clones transposantes. Se diseñaron cebadores específicos para amplificar un fragmento interno del mini-Tn5 y confirmar la inserción del transposón en los clones mutantes. Evaluación de sensibilidad a salinidad de los clones transposantes. Mediante el método de ?replica plating? se testeó la capacidad de cada colonia transposante para crecer en NaCl 400mM. Evaluación de tolerancia a distintos osmolitos. Se evaluó comparando el crecimiento en medio líquido suplementado con distintos osmolitos (NaCl, Na2HPO4, KCl, y manitol). Ensayos de nodulación. Se comparó la capacidad de nodulación y producción de biomasa aérea de los clones mutantes y la cepa tipo salvaje en L. tenuis. Resultados: De un total de 6435 transposantes analizados se seleccionaron 8 clones sensibles a 400 mM NaCl, de los cuales 7 resultaron también sensibles a otros osmolitos tanto iónicos como no iónicos (KCl, Na2HPO4 y manitol). El clon restante si bien resultó sensible a NaCl, sólo presentó un retraso en el crecimiento en presencia del resto de los osmolitos testeados. La capacidad de nodulación y eficiencia simbiótica fue variable entre los clones mutantes: la inoculación con ciertas mutantes produjo un aumento en el peso seco de las plantas en tanto que otras no tuvieron efecto o lo disminuyeron, alcanzando valores similares a las plantas control sin inocular. Por último, dos mutantes se vieron afectadas en su capacidad para formar nódulos. Conclusiones: La caracterización de las mutantes tanto en vida libre como en simbiosis sugiere que los genes afectados por el mini-Tn5 son necesarios para adaptarse a ambientes con altos niveles de salinidad y condiciones hiperosmóticas. Además, algunos de estos genes serían requeridos para establecer una simbiosis efectiva con L. tenuis.