Secuencias Repetidas en Tandem en Anaplasma marginale: potencial aplicación al estudio epidemiológico

RUYBAL PAULA; MORETTA ROSALÍA; ECHAIDE SUSANA; FARBER MARISA

Capital Federal, Buenos Aires, Argentina

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología, X Congreso Argentino de Microbiología; 2004

Sociedad Argentina de Microbiología

La anaplasmosis en los bovinos es una enfermedad que provoca importantes pérdidas económicas a la ganadería. Es causada por el patógeno transmitido por garrapata Anaplasma marginale (orden Rickettsiales, familia Anaplasmataceae), el cual invade y replica en eritrocitos maduros. La fase aguda de la enfermedad cursa con anemia, pérdida de peso. Fiebre, aborto y disminución de la producción de leche, conduciendo frecuentemente a la muerte. Una caracterización exhaustiva tanto a nivel de marcadores genéticos como de superficie de esta rickettsia representa un objetivo fundamental para el desarrollo de mejores sistemas de diagnóstico, vacunas y para comprender de forma más detallada la epidemiología del mismo. Las secuencias repetidas en tandem del ADN están compuestas por copias de patrones de nucleótidos repetidos y contiguos cola-cabeza. Estas secuencias podrían intervenir tanto en procesos regulatorios como evolutivos. A partir de la secuencia completa del genoma de A. marginale (Department of Veterinary Microbiology and Pathology, Washington Stat University, USA –www.vetmed.wsu.edu/research-vmp/anagenome-) y utilizando el programa “Repeat Zinder”(c3.biomath.mssn.edu/trf.html), que permite la localización y visualización de secuencias repetidas en tandem, fue posible detectar una secuencia de 11 nucleótidos que se haya repetida 11 veces en ele genoma de referencia (aislamiento St. Marie, USA). Se seleccionaron hasta el momento 13 muestras de brotes de la Argentina  y 5 aislamientos de referencia. Utilizando sendos cebadores diseñados a partir de las secuencias río arriba y río debajo de la región en estudio fue posible amplificar por PCR fragmentos que fueron analizados por tamaño en geles de azarosa y posteriormente secuenciados. El análisis de dichas secuencias, que se correlaciona con las diferencias de tamaño observadas en el gel de agarosa, mostró la presencia de minisatélites de 11 pb (5’CTGAGGAGTTG3’) repetidos entre 7 y 19 veces. Resulta importante destacar la presencia de estos minisatélites en el ADN de A. marginale ya que corresponden a una gran cantidad de nucleótidos independientes de la presencia de marcos abiertos de lectura en un genoma que se caracteriza por su tamaño reducido (aproximadamente 1200 Kpb).La correlación de estos polimorfismos con los patrones de variación de cada uno de los aislamientos analizados presentan en las proteínas principales de superficie (MSP4 y MSP1a), permitirá convalidar la utilidad de las repeticiones en tandem como nuevos marcadores. Esta metodología de alta sensibilidad y fácil interpretación permitiría diferenciar los diversos aislamientos, configurándose como una nueva herramienta para estudios epidemiológicos.