PRODUCCIÓN DE ALFA-AMILASA A PARTIR DE UN CULTIVO INDUCIDO CON DESECHOS DE LA COSECHA DE TRIGO DE LA PAMPA HÚMEDA ARGENTINA

PORFIRI, MA. CECILIA; PICO, GUILLREMO; FARRUGGIA, BEATRIZ; ROMANINI, DIANA

Guadalajara

Congreso; XVI Congreso Nacional de Biotecnología y Bioingeniería de México; 2015

Sociedad Mexicana de Biotecnología y Bioingeniería (SMBB)

La alfa amilasa es una enzima muy requerida por diversas industrias en grandes cantidades, lo que implica que su producción requiera de metodologías eficientes, fáciles de escalar y de bajo costo que no causen perjuicios al medio ambiente (1). Una estrategia que cumple con estos requisitos es la producción fúngica en medio líquido empleando un desecho rico en almidón como inductor de la secreción de la enzima y su posterior precipitación en el filtrado del cultivo empleando polímeros de afinidad. La precipitación de un complejo enzima-polímero requiere un exhaustivo estudio de condiciones del medio y un cultivo con presencia mayoritaria de la enzima de interés (2). La optimización de las condiciones de la precipitación implica una afinidad diferencial del polímero por la proteína de interés respecto de las otras proteínas presentes en el filtrado del cultivo. El objetivo de este trabajo fue determinar las condiciones óptimas de cultivo inducido por rastrojo de trigo que permitan aplicar un diseño de precipitación con polímeros aniónicos para luego obtener la enzima.Los resultados de la precipitación con el poliacrilato (PAA) y la enzima comercial resultaron satisfactorios tanto en términos de purificación (FP: 7.40), rendimiento (R%: 87.6) como en la concentración de la enzima, dado que además se reduce sustancialmente el volumen donde está contenida la misma. Las actividades de alfa-amilasa en los filtrados empleando ambas fuentes de carbono fueron elevadas: 59.72 U/L y 48.73 U/L para los medios A y B, respectivamente. Luego de implementar la metodología de precipitación las actividades alcanzadas en los precipitados redisueltos (PP), sobrenadantes (SN) y controles indican un alto poder precipitante del PAA. Los elevados rendimientos porcentuales hacen a esta metodología eficaz para la obtención y posible concentración de la enzima a partir de fuentes naturales de la misma, como lo es un cultivo fúngico de A. oryzae, logrando purificar la proteína 2 o 2.9 veces, según el medio, respecto de la muestra de partida. Por otro lado, el empleo de fuentes alternativas de sustrato para el crecimiento del microorganismo y estimulación de la síntesis de alfa-amilasa resultó ser una estrategia útil para el empleo de materias primas sin valor comercial.