INVESTIGADORES
ROMANINI Diana
congresos y reuniones científicas
Título:
ESTUDIOS PRELIMINARES DE VARIABLES QUE CONDICIONAN LA FORMACIÓN DE COMPLEJOS INSOLUBLES ENTRE PECTINASA DE Asprgillus niger Y ALGINATO
Autor/es:
FACCENDINI, PABLO; TULIN, GONZALO; ROMANINI, DIANA
Lugar:
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIX Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2015
Institución organizadora:
aaiFQ Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica
Resumen:
Las pectinasas son un conjunto de enzimas que catalizan la degradación de sustancias pécticas de la pared celular de las plantas. Se utilizan en las industrias alimenticias para la clarificación de jugos de frutas, vinos, vinagres jarabes y gelatinas. La poligalacturonasa (PG), EC 3.2.1.15, la cual cataliza la hidrolisis del enlace α1-4 del ácido poligalacturónico para producir poligalacturonatos de menor peso molecular [1].La formación de complejos insolubles entre proteínas y polímeros iónicos de cadena flexible (PE) ha surgido como una alternativa a aplicarse en distintas áreas de la biotecnología con el fin de contribuir a la industria en la purificación de proteínas o en la inmovilización de enzimas en biorreactores [2], entre otras aplicaciones. La interacción entre una proteína y un PE de carga opuesta depende de las condiciones del medio como pH, temperatura, fuerza iónica y por la relación molar óptima de la proteína y el PE. Cambiando las condiciones del medio como el pH se puede redisolver el complejo y disociar el PE de la enzima de interés [3].El objetivo de este trabajo fue analizar las variables fisicoquímicas del medio que conducen a la formación de complejos insolubles entre PG y el alginato (ALG) de sodio como punto de partida del diseño de una estrategia bioseparativa de dicha enzima a partir de Aspergillus niger.Los diagramas de solubilidad de los complejos PG/ALG se realizaron midiendo la absorbancia a 420nm. La precipitación del complejo se realizó mezclando alícuotas de ambas especies a diferentes relaciones entorno a la óptima. Las actividades enzimáticas se determinaron cuantificando azúcares reductores con el reactivo de DNS [4], tanto en el sobrenadante como en el en el precipitado redisuelto, empleando como control una solución de enzima a pH 6,00. La mejor recuperación de actividad en el precipitado se consiguieron utilizando ALG al 0,004% P/V, PG de 0,19 mg/mL en solución tampón HAc/NaAc 50 mM, de pH=3,00; el pH de redisolución óptimo fue 6,00. El porcentaje de actividad recuperada fue del 50% a temperatura ambiente.Los resultados obtenidos han demostrado que la formación del complejo insoluble entre la PG y ALG involucra un alto número de moléculas de enzima unidas por molécula de polímero, lo que hace a esta metodología un estrategia apta para la purificación de PG de un cultivo de A. niger con bajo impacto ambiental.[1] D. Biscaro Pedrolli, A. Costa Monteiro, E. Gomes, E. Cano Carmona. The Open Biotechnology Journal, 3 (2009) 9-18.[2] A. Lali, N. Aruna , J. Roshnnie , T. Devika. Proc Biochem 35 (2000) 777-785.[3] J. Breccia, B. Mattiasson, F. Siñeriz. J Biotech 61 (1998) 219-223[4] G. L. Miller. Analytical Chemistry. 31(3) (1959)