INTERACCION DE POLIELECROLITOS SINTÉTICOS CON PROTEINAS MODELO COMO PUNTO DE PARTIDA DE LA BIOSEPARACION.

BRAIA, MAURICIO; ROMANINI, DIAMA; PICÖ, GUILLERMO

Rosario

Congreso; VIII Congreso - XXVI Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario, 2006.; 2006

Sociedad de Biología de Rosario

INTERACCION DE POLIELECROLITOS SINTÉTICOS CON PROTEINAS MODELO COMO PUNTO DE PARTIDA DE LA  bioseparaciOn. Mauricio Braia,  Diana Romanini y Guillermo Picó. Area Fisicoquímica. Departamento de Química-Física Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. U.N.R. Uno de los desafíos de la biotecnología actual es la obtención de productos naturales de alto valor comercial empleando técnicas económicas y sencillas que puedan aplicarse en macro escala. Un ejemplo de esto es la precipitación selectiva de proteínas provenientes de un extracto crudo utilizando polielectrolitos sintéticos. El objetivo de este trabajo fue estudiar la formación de complejos insolubles entre el polielectrolito polivinil-sulfonato de sodio (PVS) y proteínas de interés: tripsina, papaína y lisozima,  analizar las condiciones del medio que condicionan a la formación y la redisolución de dichos complejos y evaluar el estado conformacional de la proteína durante el proceso. Para estudiar la formación y la disolución del complejo polielecrolito-proteína se utilizaron técnicas especrofotométricas (turbidez a 420nm), calorimetría de titulación isotérmica y calorimetría diferencial de barrido. La estabilidad de la proteína se evaluó midiendo la actividad enzimática de las proteínas en presencia del polielecrolito y a través del tiempo. Se estudiaron además las condiciones del medio que producen una máxima precipitación a temperatura ambiente: pH, fuerza iónica, concentración de polímero, relación [polielecrtolito]/[proteína]. Se observó que la máxima turbidez de los complejos PVS-proteína se obtuvo en ausencia de sales en el medio y a pH 3,2 para tripsina y  pH 7,0 para lisozima y papaína. La actividad enzimática de tripsina y papaína no se vio significativamente modificada por la presencia de PVS, ni disminuyó en el tiempo. Las curvas de calorimetría de titulación mostraron una interacción que se ajusta a un modelo cooperativo para tripsina y lisozima. La Tm (temperatura a la cual la mitad de la proteína está desnaturalizada) obtenida por calorimetría diferencial de barrido no mostró cambio para la lisozima, aunque si lo hizo el DH (variación de entalpía), el cual aumentó significativamente en presencia de PVS. La redisolución de los complejos PVS-proteína se obtuvo en todos los casos ajustando la fuerza iónica del medio a 2,5M. Los resultados obtenidos demuestran una alta potencialidad del PVS como precipitante de proteínas de alto punto isoeléctrico sin modificación de su actividad biológica.