Efecto de la sobreexpresión del mutante TßRIIB-deltaC en células estromales mesenquimales humanas.

TANIA MELINA RODRÍGUEZ; ALEJANDRA CARREA; ALEJANDRO SALDIAS; MARCELO IRIGO; MARCELO J. PERONE; JORGE VELASCO ZAMORA; RICARDO A DEWEY

Mar del Plata

Congreso; LIX Reunión Cientifica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2014

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

La utilización de mutantes dominante negativos del receptor II de TGF-ß (TßRIIA-DN) carente del dominio citoplasmático ha sido instrumental para la elucidación de funciones y mecanismos de señalización de TGF-ß1 en diferentes tipos celulares. En células modificadas genéticamente que expresen este receptor mutado, se bloquea la señalización por TGF-ß1. Recientemente se ha caracterizado en humanos una nueva isoforma del ese receptor, denominada TßRIIB, producida por splicing alternativo de TßRIIA resultando en la adición de 25 aa en el dominio extracelular del receptor maduro. Este se une y señaliza directamente vía TGF-ß2 sin el requerimiento de TßRIII. Esta nueva isoforma ha sido detectada en condrocitos, osteoblastos y células precursoras mesenquimales humanas. Hasta el momento se desconoce el modo de acción del mutante carente del dominio citoplasmático del receptor B (TßRIIB-deltaC) y la influencia que ejerce sobre las células estromales mesenquimales humanas. Para estudiar este mutante, generamos vectores lentivirales SIN bicistónicos que codifican TßRII-dC o TßRIIA-DN y eGFP, y uno control que codifica sólo eGFP. Con esos vectores transdujimos células estromales mesenquimales de tejido adiposo (ASC) y las enriquecimos a alta pureza (90%) mediante separación celular por fluorescencia, basado en la expresión de eGFP. En ASC, y en presencia de TGF-ß1, ß2 y ß3, analizamos mediante RT-qPCR y ensayo de MTT, el efecto de la sobreexpresión de TßRII-∆c sobre la producción de los ARNm de las variantes naturales del receptor y el efecto sobre la proliferación celular, respectivamente. Nuestros resultados sugieren que TßRII-dc actúa de modo inverso a TßRIIA-DN, siendo un agonista de TGF-ß1 y un inhibidor de la cascada de señalización de TGF-ß2 y ß3. Además estudiamos el efecto de TßRIIB-dc sobre la secreción por parte de las ASC de un panel de 80 citoquinas y quimioquinas, tanto en presencia como en ausencia de TGF-ß1.