Producción de la hormona de crecimiento del pejerrey como estrategia para la optimización de cultivos intensivos y semi-intensivos.

SCIARA, A.; SOMOZA, G.M.; ARRANZ, S.

Chascomús. Argentina

Congreso; Jornadas de Biología del Pejerrey; 2004

IIB-INTECH

PRODUCCIÓN DE LA HORMONA DE CRECIMIENTO DEl PEJERREY COMO ESTRATEGIA PARA LA OPTIMIZACIÓN DE CULTIVOS INTENSIVOS Y SEMI-INTENSIVOS. Sciara, Andrés1; Somoza, Gustavo M.2 y Arranz, Silvia1. 1Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario (IBR/CONICET) asciara@fbioyf.unr.edu.ar 2Instituto de Investigaciones Biotecnológicas.Instituto Tecnológico de Chascomús (IIB-INTECH) El pejerrey bonaerense (Odontesthes bonariensis) es un pez autóctono cuya calidad de carne y mercados de venta lo hacen interesante para su explotación comercial. Si bien se ha trabajado en el cultivo del pejerrey, aún no se han obtenido tasas de crecimiento adecuadas para su cultivo intensivo. Se ha probado en numerosas especies de peces que el suplemento de la alimentación con Hormona de Crecimiento (GH) incrementa la velocidad de crecimiento, la tasa de conversión alimentaria y la sobrevida de los alevines. La obtención del producto a un costo mínimo es fundamental cuando se desea producir proteínas de bajo valor agregado. E.coli es la bacteria más extensamente estudiada desde el punto de vista genético y fisiológico siendo además el organismo más utilizado en la expresión de proteínas recombinantes. El objetivo del siguiente trabajo es producir GH de pejerrey recombinante (pjGHr) en sistemas bacterianos para su uso en acuicultura y generar ensayos in-vitro para la evaluación de su actividad. Para ello se obtuvo por técnicas de RT-PCR la secuencia que codifica para la proteína madura de pjGH y subclonó en un vector pET-24 transformado con el mismo una E.coli BL21 modificada para producción de proteínas recombinantes con alta eficiencia induciendo con Lactosa. Mediante lisis celular en French Press y centrifugación se obtuvo la proteína en cuerpos de inclusión (CI), ésta representa un 26% del peso seco de las células. El rendimiento alcanzado es de aprox. 0,5 gs de pjGHr cada litro de cultivo. Con el propósito de tener herramientas para evaluar el nivel de GH en plasma (ELISA) se generaron anticuerpos contra pjGH (AcGH). Análisis de extractos de hipófisis por Western Blots sumado a inmuno-histoquímicas en cortes de hipófisis muestran la especificidad de los AcGH. En el presente trabajo logramos obtener la pjGHr con altos rendimientos y pureza sin métodos costosos de purificación. Se generaron además las herramientas para la determinación de la actividad de la pjGHr in vitro y su concentración plasmática.