VALIDACIÓN DE UN PROTOCOLO DE ANÁLISIS DE ADN AMBIENTAL PARA LA DETECCIÓN DE ANFIBIOS EN ENTORNOS URBANOS

BORRE TOMÁS; AMAVET, PATRICIA; DEMARTÍN, ROCIO PAMELA; GHIRARDI, ROMINA; LOPEZ JAVIER ALEJANDRO

Santa Fe

Congreso; 84 Reunión de Comunicaciones Cientificas de la Asociacion de Ciencias Naturales del Litoral; 2025

AHA - INALI (CONICET-UNL) - FHUC (UNL)

La ciudad de Santa Fe posee ambientes que funcionan como refugio de algunas especies de anfibios anuros nativos, permitiendo así su conservación en el entramado urbano. Sin embargo, el monitoreo de la anurofauna urbana mediante metodologías tradicionales de muestreo (p.e. recorridos nocturnos) se ve dificultado por problemas de acceso, inseguridad, etc., por lo que resulta necesario implementar nuevas herramientas que permitan optimizar el monitoreo de anfibios urbanos. El estudio de ADN ambiental es una técnica de monitoreo indirecto altamente sensible que permite detectar especies en bajas densidades poblacionales y en sitios de difícil acceso. El objetivo del presente trabajo fue validar el protocolo de análisis de ADN ambiental para la detección de anfibios en ambientes urbanos de la ciudad de Santa Fe. Para esto, se tomaron muestras de 1 litro de agua en cuatro sitios con distinto grado de urbanización del área metropolitana de la ciudad de Santa Fe (Santa Fe, Argentina) en las temporadas cálida y fría. Las muestras se filtraron empleando filtros de polietersulfona de 1,2 micras de tamaño de poro y se extrajo ADN siguiendo el protocolo de cloroformo-isoamílico para su posterior análisis. En función del conocimiento previo de la anurofauna presente en dichos ambientes, se seleccionaron dos especies abundantes (Rhinella arenarum y Elachistocleis bicolor) y dos poco abundantes (Physalaemus biligonigerus y Pseudopaludicola falcipes) como objetivos de detección, y se diseñaron primers especie-específicos para amplificar una región del gen mitocondrial 12S por PCR cuantitativa (qPCR) para cada especie. Cada par de primers fue evaluado mediante la construcción de curvas estándar, generadas a partir de diluciones seriadas de un pool de ADN ambiental y ADN genómico de la especie objetivo extraído de ejemplares depositados en la colección del Instituto Nacional de Limnología. Se obtuvieron valores de eficiencia óptimos y las curvas de melting presentaron picos únicos correspondientes con la temperatura esperada para los productos de amplificación. Las reacciones de qPCR con ADN ambiental permitieron la detección de 3 especies (R. arenarum, P. biligonigerus y E. bicolor) en las muestras obtenidas en las dos temporadas, mientras que P. falcipes fue detectada sólo en las muestras obtenidas en la temporada fría. Estos resultados destacan la utilidad de la técnica como complemento de las metodologías tradicionales de monitoreo para la detección de especies de anfibios con distintos niveles de abundancia en ambientes urbanos.