DISEÑO DE FOTOSENSIBILIZADORES DE TERCERA GENERACIÓN Y EVALUACIÓN DE SU POTENCIAL ACTIVIDAD EN TERAPIA FOTODINÁMICA DE TUMORES

MARIA ANTONELLA GONZALEZ GRAGLIA; AGUSTIN I. SUAREZ; MARIA T. BAUMGARTNER; MARIANA MIRETTI; CÉSAR G. PRUCCA

Córdoba

Jornada; IX Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2024

La terapia fotodinámica (TFD) consiste en la aplicación de un fotosensibilizador (FS) que al ser irradiado en presencia de oxígeno, genera especies reactivas de oxígeno que llevan a la muerte celular. Las ftalocianinas (Pcs) son FSs de 2o generación (GEN) que, al incorporarlas en carriers que faciliten su llegada a las células se conocen como FSs de 3o GEN. La presente tesis doctoral tiene como objetivo general diseñar, sintetizar y caracterizar FSs de 3o GEN, a través de la síntesis de diversos sistemas de transporte que incrementen la efectividad de la TFD de tumores. Para ello se plantearon tres objetivos específicos: sintetizar FSs de 3o GEN basados en Pcs incorporadas en liposomas; luego, caracterizar los FSs de 3o GEN; y finalmente, evaluar la actividad in vitro de los FSs de 3o GEN en TFD para glioblastoma. Como resultados preliminares, para lograr la síntesis de los FSs de 3o GEN se siguió el protocolo de inyección en etanol, utilizando Zn-ftalocianina (ZnPc) como el FS de 2o GEN. Se utilizaron distintas combinaciones de lípidos, DPPC-colesterol, DPPC-DOTAP y DPPC-DOTAP-colesterol que a su vez presentan distintas relaciones molares de DOTAP. Se midió el tamaño de cada formulación con las diferentes cantidades de ZnPc en el día de preparación (día 0), y a los 7, 15 y 28 días posteriores. Se observó que la presencia de lípido catiónico (DOTAP) provoca un aumento en el tamaño de los liposomas. Este comportamiento se observa tanto para los liposomas vacíos (sin ZnPc) como para los que contienen el FS. A su vez, se observó un efecto interesante del colesterol que se hizo evidente al analizar el comportamiento del tamaño de las vesículas a lo largo del tiempo: el colesterol evita que haya un aumento de tamaño brusco a medida que pasa el tiempo. Además, en el día 0, se midió el valor de potencial zeta y se realizó la caracterización fotofísica midiendo los espectros UV-visible y de fluorescencia de las formulaciones. Respecto del potencial zeta, los liposomas compuestos solo de DPPC presentaron un valor de ~ -2 mV, mientras que los liposomas compuestos por DPPC-DOTAP evidenciaron un potencial positivo cuyo valor dependía del porcentaje de DOTAP: cuando éste era de 20%, el potencial era cercano a 25 mV; mientras que se obtuvo un potencial de 10 mV para liposomas con 10% de DOTAP. El potencial zeta no se vio afectado por la presencia o ausencia del FS. Respecto a las propiedades fotofisicas, se encontró que la ZnPc dentro del liposoma mantenía la capacidad de absorber luz y de emitirla en forma de fluorescencia. Habiendo preparado y caracterizado las formulaciones, las más adecuadas para ser evaluadas de TFD en células T98G de glioblastoma, el cual consiste en incubar los FSs con las células de interés durante diferentes tiempos para luego someterlas a irradiación con la misma dosis de luz empleando LEDs. La viabilidad se determinó 24 horas después de irradiar. Al evaluar la potencialidad de las formulaciones en TFD, se encontró que las formulaciones con DOTAP fueron eficientes en el delivery del FS con sólo 3 horas de incubación con las células, desencadenado muerte celular; mientras que las formulaciones sin DOTAP se asociaron a la misma capacidad de inducción de muerte con 18 horas de incubación. Estos resultados muestran que las nuevas formulaciones liposomales representan un gran potencial para su empleo en ensayos in vivo disminuyendo los periodos de contacto con las células lo que se traduciría en un tratamiento menos prolongado.