EFECTO DE INDUCTORES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Y LAEXPRESIÓN DE ISOENZIMAS DE LACASA

FONSECA MI; RAMOS H AB; FARIÑA JI; VILLALBA LL; ZAPATA PD

Bs. As.

Congreso; XII CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGÍA; 2010

Asociación Argentina de Microbiología (AAM)

Introducción: Los hongos de pudrición blanca son los únicos organismos capaces de degradar eficientemente la lignina debido a que poseen un sistema enzimático oxidativo que ataca la molécula de lignina, una de las más importantes es la Lacasa (Lac). Se sabe que, factores tales como metales pesados o compuestos aromáticos, influyen en la producción de Lac, esto ha sido estudiado en varias especies. Con la utilización de estos sistemas enzimáticos, manipulados para su sobreexpresión, la industria celulósico-papelera podría favorecerse logrando optimizar los procesos tecnológicos con un menor impacto ambiental. Objetivo: detectar y cuantificar la producción de Lac inducida tanto por sulfato de manganeso (SO4Mn) como por ácido sinápico y el efecto de dichos compuestos sobre el crecimiento y la secreción proteica en Peniophora sp BAFC 633. Materiales y métodos: El hongo se cultivó a 29 ºC, pH 4,5 en 50 mL de medio (extracto de malta 12,7 g/L, extracto soluble de maíz 0,5 %) suplementado al día cero con SO4Mn y al tercer día de cultivo con ácido sinápico, ambos a concentraciones finales de 0,3 mM; 0,1 mM y de 0,02 mM, en ensayos por separado durante 7, 10 y 14 días, en presencia de un control sin inductor. Cada día especificado se separó el micelio, para determinar biomasa, del sobrenadante utilizado para cuantificar proteinas mediante el método de Bradford. Además con el sobrenadante se cuantificó actividad Lac por espectrofotometría a 469 nm usando como sustrato 2,6–dimetoxifenol (DMP). La enzima se caracterizó mediante geles de poliacrilamida desnaturalizantes y no desnaturalizantes revelados con DMP. Con el programa GraphPad Prism 5.0 se realizó el análisis estadístico.Peniophora sp BAFC 633. Materiales y métodos: El hongo se cultivó a 29 ºC, pH 4,5 en 50 mL de medio (extracto de malta 12,7 g/L, extracto soluble de maíz 0,5 %) suplementado al día cero con SO4Mn y al tercer día de cultivo con ácido sinápico, ambos a concentraciones finales de 0,3 mM; 0,1 mM y de 0,02 mM, en ensayos por separado durante 7, 10 y 14 días, en presencia de un control sin inductor. Cada día especificado se separó el micelio, para determinar biomasa, del sobrenadante utilizado para cuantificar proteinas mediante el método de Bradford. Además con el sobrenadante se cuantificó actividad Lac por espectrofotometría a 469 nm usando como sustrato 2,6–dimetoxifenol (DMP). La enzima se caracterizó mediante geles de poliacrilamida desnaturalizantes y no desnaturalizantes revelados con DMP. Con el programa GraphPad Prism 5.0 se realizó el análisis estadístico. Resultados: En los ensayos con SO4Mn, no se observaron diferencias significativas (p>0,05) sobre la biomasa, secreción proteica y la actividad enzimática de Lac en ninguno de los tratamientos. Sin embargo, se detectaron dos isoenzimas, una constitutiva de 60 kDa que aparece en todos los tratamientos y otra inducida de 75 kDa presente únicamente en el ensayo con 0,1 mM de SO4Mn del día 14 de cultivo. Respecto a los tratamientos con ácido sinápico, el máximo crecimiento se produjo el día 14 en los ensayos con 0,02 mM y 0,3 mM de ácido sinápico (p<0,01). En cuanto a la secreción proteica, no se observó diferencias significativas en ninguno de los tratamientos (p>0,05). Por otro lado, no se observaron diferencias significativas en la actividad enzimática en ninguno de los tratamientos ensayados (p>0,05) y fue posible detectar una isoenzima constitutiva de 60 kDa en todos los tratamientos y otra inducida de 75 kDa presente únicamente en el ensayo con 0,02 mM de ácido sinápico en el día 14 de cultivo. Conclusiones: En los ensayos con SO4Mn, los resultados obtenidos parecen indicar que dicho compuesto no actuaría como inductor enzimático. Aunque la presencia de isoenzimas inducibles podría indicar otro tipo de regulación. En el caso del inductor aromático, el ácido sinápico podría estar involucrado en la inducción de Lacasa, aunque no es posible conocer el mecanismo subyacente. Por lo que es fundamental avanzar sobre el conocimiento de la regulación a nivel genético de la transcripción y la traducción de enzimas ligninolíticas.