Caracterización Genética de Cepas aisladas de suelos con Boro

NORMA MORAGA; RAMIRO POMA; HÉCTOR A. CRISTÓBAL; MARIA J. AMOROSO; VERÓNICA RAJAL

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología (AAM); 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción: La provincia de Salta encabeza a nivel nacional la exportación de minerales de boro y sus derivados. Como muchas otras explotaciones mineras genera problemas puntuales de contaminación. La biorremediación se plantea como una alternativa moderna para solucionar problemas ambientales. Es por ello y por ser productores de antibióticos, que los Actinomycetes, en particular el género de los Streptomyces, han sido ampliamente estudiados. Esto y la necesidad de patentar generaron un establecimiento descontrolado de nuevas especies, por lo que resultó imperioso establecer criterios estándares de clasificación. Otros autores realizaron una extensa investigación fenética en cepas de cultivo que permitió agrupar las cepas de Streptomyces en diferentes clusters detallados en el Manual de Sistemática Bacteriológica de Bergey. Los grupos generados empleando el análisis de secuencias de ADNr 16S se corresponden satisfactoriamente con los grupos fenotípicos definidos por Williams Objetivos: A partir de las secuencias del ADNr 16S obtenido de 9 cepas de Actinomycetes aisladas de suelos contaminados con Boro se plantearon: Identificar las especies y ubicarlas taxonómicamente en la clasificación existente para miembros del grupo Actinomycetae. Realizar un análisis filogenético. Materiales y Métodos: En trabajos previos se realizaron diferentes ensayos a partir de los cuales se seleccionaron las cepas Gram Positivas que presentaron mayor tolerancia a Boro para su caracterización genética. El ADN de las mismas se extrajo usando un kit comercial, realizando algunas variaciones en el protocolo provisto por el fabricante. Se amplificó con primers universales publicados previamente usando un termociclador. Se detectaron los productos de PCR por electroforesis en gel de agarosa al 2%. Las dos cadenas de los fragmentos de ADN amplificados fueron secuenciadas (MACROGEN® Korea) y las secuencias obtenidas se editaron con el programa Chromas Lite versión 2 y se subieron a la base de datos GeneBank®. A partir de los fragmentos secuenciados y de secuencias pertenecientes a la misma especie o estrechamente relacionadas en el GeneBank®, se realizó el alineamiento y análisis filogenético utilizando el programa MEGA version 4. Para la construcción del árbol filogenético se empleó el método de Neighboring-Joining con la distancia de Kimura. Resultados: Mediante el análisis filogenético se determinó la posición taxonómica de los organismos aislados dentro del marco provisto por la clasificación establecida por Williams. En la tabla se detallan los organismos que presentaron mayor homología con los aislamientos realizados. Cepa Especie con mayor homología % Homología Cluster según Williams 002 S. iakyrus 100 12 048 S. achromogenes 99,4 19 128 S. lincolnensis 99,8 19 050 S. fradie 99,7 68 051 S. ambofaciens 99,8 23 053 S. albogriseolus 99,9 12 130 S. polychromogenes 99,8 61 133 Streptomyces sp. 98,2 ? 132 Lentzea sp. 99,2 ? Conclusiones: Se identificaron los distintos aislamientos: 8 Streptomyces y uno del género Lentzea (Actinomycetae) La cepa 133 es la que posee menor homología y no tiene asignada especie. Este trabajo identifica y sitúa taxonomicamente a cepas con gran interés biotecnológico por presentar gran tolerancia a boro.