PROIMI   05436
PLANTA PILOTO DE PROCESOS INDUSTRIALES MICROBIOLOGICOS
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Purificación y caracterización parcial de una lipasa producida por Brevibacillus agri MIR-E12
Autor/es:
CARLOS NIETO PEÑALVER; FLAVIA LOTO; CINTIA ROMERO; GUILLERMO CASTRO; MARIO BAIGORI
Lugar:
Tafi del Valle
Reunión:
Jornada; XXVI jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán.; 2009
Resumen:
Las lipasas de origen microbiológico poseen un gran potencial en el desarrollo de aplicaciones comerciales debido a su estabilidad, selectividad y amplia especificidad de sustratos. El objetivo de este trabajo es la caracterización de una lipasa producida por Brevibacillus agri MIR-E12, aislada de una muestra de suelo. La cepa fue cultivada aeróbicamente en medio LB a 37ºC durante 24 hs. El cultivo fue centrifugado y la enzima fue purificada a partir del sobrenadante libre de células. Luego de una precipitación con sulfato de amonio, y una segunda precipitación con acetona a -20ºC por 24-48 hs., las muestras fueron fraccionadas por cromatografía de intercambio aniónico. La purificación se determinó en geles de SDS-PAGE teñidos con nitrato de plata. La actividad lipasa se determinó espectrofotométricamente utilizando como sustrato p-nitrofenil palmitato a diferentes pH y temperaturas. Se estudió el efecto de diferentes cationes y solventes sobre la actividad enzimática. Los resultados encontrados muestran que B. agri MIR-E12 produjo, en la condición de cultivo ensayada, una lipasa de aproximadamente 20 kDa, con una temperatura óptima de 40ºC y un pH óptimo de 9. La enzima no fue termoestable; sin embargo, el agregado de Ca2+ aumentó significativamente su resistencia térmica. El agregado del solvente dimetil sulfóxido incrementó la actividad enzimática. La presencia de detergentes como el Tween 80, Tween 20, SDS y Triton X100 inhibió aproximadamente un 80% la actividad, a diferencia del deoxicolato, el 2-propanol y el glicerol que solo la afectaron ligeramente. Dentro de los cationes, es de destacar el incremento producido por el agregado de Ca2+, el que se encontró relacionado con la marcada disminución por el quelante EDTA. Los resultados encontrados muestran que B. agri MIR-E12 produce una lipasa con importantes características biotecnológicas.