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JU‐1364Producción de bioíndigo por Pseudomonas sp. P26.M Ferrero1,2, J Lara1, M Díaz Alfaro1, V Baigorria1, M Lucca1,21Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos (PROIMI‐CONICET), Tucumán, Argentina. 2Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia,Universidad Nacional de Tucumán (UNT), San Miguel de Tucumán, Argentina.La oxidación de indol y posterior producción de índigo es una reacción química que puede utilizarse como indicador de actividad naftaleno 1,2 dioxigenasa (NDO). Esta propiedad es fuertemente inducida en bacterias luego de la exposición a cristales de naftaleno en placas de medio sólido. La actividad NDO se determina colorimétricamente, luego del crecimiento de los microorganismos en presencia de diferentes HAPs. La técnica se fundamenta en la capacidad de ciertos microorganismos de transformar indol a cis-2,3-dihidroxi-2,3-dihidroindol, el cual por deshidratación espontánea se transforma en indoxil, seguido por una dimerización que concluye en la síntesis de índigo, un colorante azul que se observa directamente sobre las colonias o puede medirse espectrofotométricamente a 600 nm. Pseudomonas sp. P26 fue aislada de sedimento marino contaminado de Muelle Storni, Chubut, mediante un cultivo de enriquecimiento selectivo con naftaleno, para aislar bacterias degradadoras de hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAPs). Pseudomonas sp. P26 modifica el color de sus colonias a azul oscuro, por acumulación del índigo formado, luego de la exposición a vapores de indol. Se ensayaron concentraciones de indol, como sustrato para la reacción enzimática. entre 0,025 y 5 mM. La formación de índigo no pudo ser determinada cuando se utilizaron concentraciones inferiores a 1 mM de indol. A concentraciones superiores, hubo un aumento sensible en la producción hasta alcanzar un máximo cuando la concentración de indol fue de 2,5 mM. A partir de ahí se alcanzaron concentraciones cada vez menores de colorante a medida que aumentaba la concentración de indol en la mezcla de reacción, hasta un máximo de 5 mM de indol. El índigo formado fue extraído a distintos tiempos de las células usando DMF y monitoreado mediante lectura en espectrofotómetro a 600 nm. Se calcula la concentración del índigo formado utilizando el coeficiente de extinción molar del índigo (ε índigo=3,53 L/mol). La velocidad máxima de producción de índigo fue de 0,56 nmoles min-1 mg biomasa seca-1. Esa velocidad fue alcanzada luego de 1 hora de iniciada la reacción, llegando a obtener una concentración de índigo de 75.5 μM en 8 horas, siendo la máxima concentración de colorante obtenido de 138,1 μM luego de 20 h de incubación de las células enteras con el indol. La exposición a HAPs genera en Pseudomonas sp. P26 un incremento en la velocidad de transformación de indol a índigo.La exposición a diferentes HAPs genera en Pseudomonas sp. P26 un incremento en la velocidad de transformación de indol a índigo. La inducción‐producción‐extracción de índigo en un mismo sistema batch, fue ensayada.JU‐1364Producción de bioíndigo por Pseudomonas sp. P26.M Ferrero1,2, J Lara1, M Díaz Alfaro1, V Baigorria1, M Lucca1,21Planta Piloto de Procesos Industriales Microbiológicos (PROIMI‐CONICET), Tucumán, Argentina. 2Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia,Universidad Nacional de Tucumán (UNT), San Miguel de Tucumán, Argentina.La oxidación de indol y posterior producción de índigo es una reacción química que puede utilizarse como indicador de actividad naftaleno 1,2dioxigenasa (NDO). Esta propiedad es fuertemente inducida en bacterias luego de la exposición a cristales de naftaleno en placas de medio sólido. La actividad NDO se determina colorimétricamente, luego del crecimiento de los microorganismos en presencia de diferentes HAPs. La técnica se fundamenta en la capacidad de ciertos microorganismos de transformar indol a cis‐2,3‐dihidroxi‐2,3‐dihidroindol, el cual por deshidratación espontánea se transforma en indoxil, seguido por una dimerización que concluye en la síntesis de índigo, un colorante azul que se observa directamente sobre las colonias o puede medirse espectrofotométricamente a 600 nm.Pseudomonas sp. P26 fue aislada de sedimento marino contaminado de Muelle Storni, Chubut, mediante un cultivo de enriquecimiento selectivo con naftaleno, para aislar bacterias degradadoras de hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAPs). Pseudomonas sp. P26 modifica el color de sus colonias a azul oscuro, por acumulación del índigo formado, luego de la exposición a vapores de indol.Se ensayaron concentraciones de indol, como sustrato para la reacción enzimática. entre 0,025 y 5 mM. La formación de índigo no pudo ser determinada cuando se utilizaron concentraciones inferiores a 1 mM de indol. A concentraciones superiores, hubo un aumento sensible en la producción hasta alcanzar un máximo cuando la concentración de indol fue de 2,5 mM. A partir de ahí se alcanzaron concentraciones cada vez menores de colorante a medida que aumentaba la concentración de indol en la mezcla de reacción, hasta un máximo de 5 mM de indol.El índigo formado fue extraído a distintos tiempos de las células usando DMF y monitoreado mediante lectura en espectrofotómetro a 600 nm. Se calcula la concentración del índigo formado utilizando el coeficiente de extinción molar del índigo (ε índigo=3,53 L/mol). La velocidad máxima de producción de índigo fue de 0,56 nmoles min‐1 mg biomasa seca‐1. Esa velocidad fue alcanzada luego de 1 hora de iniciada la reacción, llegando a obtener una concentración de índigo de 75.5 μM en 8 horas, siendo la máxima concentración de colorante obtenido de 138,1 μM luego de 20 h de incubación de las células enteras con el indol.La exposición a diferentes HAPs genera en Pseudomonas sp. P26 un incremento en la velocidad de transformación de indol a índigo. La inducción‐producción‐extracción de índigo en un mismo sistema batch, fue ensayada.