Caracterización de la producción y purificación del antimicrobiano producido por la cepa Fusarium oxisporum LY46.2

ANABELLA SARLI; OSVALDO DELAGADO; GABIELA FURQUE; MARIA LAURA WERNING; JULIA FARIÑA

Rosario

Congreso; XXIII CONGRESO LATINOAMERICANO DE MICROBIOLOGÍA; 2016

Asociación Civil de Microbiología General

La bioprospección constituye una estrategia valiosa para la búsqueda de nuevas moléculas con actividad antimicrobiana. Desde el punto devista tanto económico como sanitario, es de suma importancia ampliar el espectro de antimicrobianos disponibles, con los cuales poder hacerfrente a la frecuente aparición de bacterias patógenas resistentes y a nuevos patógenos emergentes. Además, es de interés la exploración denuevos compuestos antimicrobianos, para su posible aplicación como bioconservantes en la industria alimenticia o como agricéuticos enagricultura.En trabajos previos, se aislaron más de 100 especímenes de hongos filamentosos con actividad antimicrobiana a partir de muestras procedentesde la Eco‐región de Las Yungas, Tucumán. El aislamiento LY 46.2, identificado por métodos moleculares como Fusarium oxisporum fueseleccionado por su amplio espectro de actividad antimicrobiana frente a patógenos Gram negativos. En el presente trabajo se llevó a cabo lacaracterización de la producción del antimicrobiano producido por dicha cepa, así como también la purificación del mismo.Se valoró la producción del antimicrobiano, en diferentes medios de cultivo (CZAPEK‐Dox, CZAPEK‐Malta, PDA, YES, MEA, LB), de los cuales, sedeterminó que el medio CZAPEK‐Dox resulta óptimo tanto para la producción así como para la purificación del antimicrobiano. Por otro lado, sedeterminó que tanto el pH inicial del cultivo (desde 4 a 8) y la temperatura de incubación del mismo (desde 15ºC a 37ºC), condicionan laproducción del compuesto antimicrobiano, siendo la temperatura óptima de producción 25ºC y el pH entre 5 y 6. También, se determinó la fasede crecimiento en la cual se produce el antimicrobiano, valorando la cinética de producción ligada a la cinética de crecimiento del micelio encultivo líquido. Se observó que la actividad antimicrobiana se comienza a detectar al final de la fase exponencial de crecimiento (0 a 72hs) y queésta aumenta en la fase estacionaria alcanzando un título máximo de 800 UA mL‐1.La recuperación y purificación del antimicrobiano se llevó a cabo a partir del sobrenadante libre de celulas tras repetidas particiones con acetatode etilo. Sólo la fase orgánica mostró actividad antimicrobiana, frente a la cepa testigo Salmonella enterica ser. Enteritidis ACC PA03(seleccionado entre otras cepas patógenas Gram (‐) a las que inhibió LY46.2).La pureza de dicha fracción se chequeó por TLC y HPLC a escala analítica en columna C18. Ambas técnicas cromatográficas revelaron lapresencia de un compuesto mayoritario y dos minoritarios, aunque solo aquel mayoritario mostró actividad antimicrobiana.