Detección del gen tirosina decarboxilasa en lactobacilos aislados de manzanas

SAVINO M.J.; NIETO PEÑALVER C.A. ; PEREZ M. B.; SAGUIR F.M.

Tafí del Valle

Jornada; XXVIII Jornadas Científicas Asociación de Biología de Tucumán; 2011

El uso de cultivos iniciadores de bacterias lácticas (BL) es una estrategia utilizada en la elaboración de vino para minimizar los problemas relacionados con fermentación maloláctica: entre ellos síntesis de AB. Tiramina, frecuentemente encontrada en alimentos, causa intoxicación si se ingiere en cantidades elevadas. Pocos estudios se han descripto con respecto a su formación en BL aisladas de manzanas a pesar de su importancia en la elaboración de sidras. En un trabajo previo determinamos la microflora láctica predominante en manzanas del norte argentino. El objetivo de este estudio fue investigar la presencia del gen tirosina decarboxilasa (tdc) en cepas de Lactobacillus plantarum (11) y una de Lactobacillus brevis a fin de identificar bacterias potencialmente productoras de tiramina. Para ello se utilizó una pareja de oligonucleótidos específica, P1-rev y p0303 que amplifica un fragmento interno del gen tdc. El protocolo empleado consistió en extracción de ADN, amplificación por PCR usando los cebadores específico y visualización en gel de agarosa. L brevis DSM20054 fue utilizada control positivo. El 33% de las cepas analizadas dieron resultado positivo, detectándose un fragmento de 370 bp en gel de agarosa, tamaño esperado para el producto de la reacción de PCR, solamente cuando las muestras de ADN de las cepas M60, M67 y M68 de L. plantarum y M15 de L. brevis estuvieron presentes en la mezcla de reacción. Este resultado indico sus potencialidades para producir tiramina. La comparación de las secuencias de los fragmentos amplificados de las cepas M68 y M15 entre sí y con secuencias de decarboxilasas de L. brevis(tdc) en cepas de Lactobacillus plantarum (11) y una de Lactobacillus brevis a fin de identificar bacterias potencialmente productoras de tiramina. Para ello se utilizó una pareja de oligonucleótidos específica, P1-rev y p0303 que amplifica un fragmento interno del gen tdc. El protocolo empleado consistió en extracción de ADN, amplificación por PCR usando los cebadores específico y visualización en gel de agarosa. L brevis DSM20054 fue utilizada control positivo. El 33% de las cepas analizadas dieron resultado positivo, detectándose un fragmento de 370 bp en gel de agarosa, tamaño esperado para el producto de la reacción de PCR, solamente cuando las muestras de ADN de las cepas M60, M67 y M68 de L. plantarum y M15 de L. brevis estuvieron presentes en la mezcla de reacción. Este resultado indico sus potencialidades para producir tiramina. La comparación de las secuencias de los fragmentos amplificados de las cepas M68 y M15 entre sí y con secuencias de decarboxilasas de L. brevistdc. El protocolo empleado consistió en extracción de ADN, amplificación por PCR usando los cebadores específico y visualización en gel de agarosa. L brevis DSM20054 fue utilizada control positivo. El 33% de las cepas analizadas dieron resultado positivo, detectándose un fragmento de 370 bp en gel de agarosa, tamaño esperado para el producto de la reacción de PCR, solamente cuando las muestras de ADN de las cepas M60, M67 y M68 de L. plantarum y M15 de L. brevis estuvieron presentes en la mezcla de reacción. Este resultado indico sus potencialidades para producir tiramina. La comparación de las secuencias de los fragmentos amplificados de las cepas M68 y M15 entre sí y con secuencias de decarboxilasas de L. brevisbrevis DSM20054 fue utilizada control positivo. El 33% de las cepas analizadas dieron resultado positivo, detectándose un fragmento de 370 bp en gel de agarosa, tamaño esperado para el producto de la reacción de PCR, solamente cuando las muestras de ADN de las cepas M60, M67 y M68 de L. plantarum y M15 de L. brevis estuvieron presentes en la mezcla de reacción. Este resultado indico sus potencialidades para producir tiramina. La comparación de las secuencias de los fragmentos amplificados de las cepas M68 y M15 entre sí y con secuencias de decarboxilasas de L. brevisL. plantarum y M15 de L. brevis estuvieron presentes en la mezcla de reacción. Este resultado indico sus potencialidades para producir tiramina. La comparación de las secuencias de los fragmentos amplificados de las cepas M68 y M15 entre sí y con secuencias de decarboxilasas de L. brevisL. brevis presentes en base de datos demostró un 98% y 96% de similitud, respectivamente. En conclusión, este es el primer estudio sobre la presencia del gen tirosina decarboxilasa en BL aisladas de manzanas provenientes de la región del Norte argentino. Los resultados demostraron que la mayoría de las cepas analizadas no presentan potencialidades para producir tiramina, lo cual favorecería su potencial aplicación en la elaboración de sidra.