Condiciones experimentales para el estudio de citotoxicidad producida por arsénico en células CHO

BONGIOVANNI, GUILLERMINA; SORIA, EA; EYNARD, ALDO R

Villa General Belgrano, Córdoba

Jornada; XIV J. Científicas Soc. Biología Córdoba; 2003

Soc. Biología Córdoba

Introducción: El arsénico es un cancerígeno altamente concentrado en las napas de agua del sudeste de la provincia de Córdoba (hasta 10 mg/L). EL consumo de este agua produce HACRE (hidroarsenismo crónico regional endémico) y generalmente deriva en cáncer de piel, vejiga o pulmón. El arsénico actúa como un estresor pro-oxidante que induce elevados niveles de OH·, induce la expresión de Hsp (heat shock proteins), altera el citoesqueleto, el crecimiento y la diferenciación celular. Objetivo: determinar en cultivos de células CHO (no tumorales) las condiciones óptimas para medir el efecto citotóxico del arsénico. Metodología: Cultivo de células: Línea celular CHO K1 en medio DME con 10% SFB. Se determinarán las concentraciones y tiempos de incubación con arsénico necesarios para inducir expresión de Hsp70. -Western blot, inmuno-citoquímica. Con estas técnicas se determinará la expresión de HSP70 los efectos sobre microfilamentos de actina. Resultados: se observó un máximo de expresión de Hsp70 luego de 1 ½ hs de incubación con 200 µM arsenito de sodio, seguido de 3 hs de recuperación sin arsenito. Los efectos sobre el citoesqueleto ocurren luego de 2 ½ hs de incubación con arsenito. Se observó reordenamiento de los filamentos de actina ubicándose en posición perinuclear con alteraciones de la forma celular. Conclusión: Encontramos marcadores de respuesta al estrés en células CHO expuestas a arsénico. Esta respuesta está relacionada con la inducción de Hsp70, cambios morfológicos y alteraciones del citoesqueleto. 200 µM arsenito de sodio y 2 ½ horas de cultivo son las condiciones que se usarán en futuros experimentos. Se están estudiando otros marcadores de estrés.