Cuantificación de isoformas de gonadotrofina coriónica humana (hCG) empleando electroforesis capilar

DABAS, P; COLLAZO, D; VIZIOLI NM

Congreso; 10º Congreso Argentino de Química Analítica; 2019

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

La gonadotrofina coriónica humana (hGC) es una glicoproteina de peso molecular 25,7 kDa. Es un heterodímero compuesto por dos subunidades asociadas no covalentemente, subunidad alfa (hCGα) y beta (hCGβ) con un total de 8 potenciales sitios de glicosilación1. La subunidad α es similar a la de otras gonadotrofinas como la hormona luteinizante, la folículo estimulante y la hormona estimuladora de la tiroides, sin embargo, la subunidad β es específica. El estudio de hCG es de gran importancia dado que es una hormona involucrada en el mantenimiento del cuerpo lúteo durante el período inicial del embarazo. Estudios previos han demostrado que el estado de glicosilación de la proteína impacta directamente sobre su función biológica, su estabilidad y su tiempo de vida media. Asimismo, varios autores han demostrado la utilidad de la electroforesis capilar (CE) para la caracterización de proteínas heterogéneas y de glicoproteínas2, siendo el objetivo de este trabajo desarrollar un método para la cuantificación de las diferentes isoformas de hCG empleando la electroforesis capilar como técnica analítica.Se empleó un equipo P/ACE MDQ (Beckman Coulter) con detector de arreglo de diodos a una longitud de onda de 200 nm. Se utilizó un material de referencia como estándar de hCG que fue disuelto en agua, fraccionado y congelado como solución stock. Se ensayaron diferentes condiciones experimentales tales como: dimensiones del capilar, composición del buffer de corrida (borato, fosfato, tricina), pH, agregado o no de modificadores como putrescina y 1,2- diaminopropano, acondicionamiento del capilar, tanto inicial como entre corridas; voltaje de separación, tiempo de inyección, temperatura de la columna. Los ensayos preliminares mostraron resultados óptimos con el buffer borato de pH 8,8, obteniéndose la separación de 8 isoformas con una resolución (USP) de 1. La CE resultaría ser una técnica de elección para la hormona en estudio.1Kessler MJ,Reddy MS,Shah RH,Bahl OP,J.Biol.Chem., 254(1979) 7901.2Laidler P,Cowan DA, Hider RC, Kicman AT,Pharm. Sci, 3,(1997), 487.Este trabajo fue realizado con el financiamiento de la Universidad de Buenos Aires.