INVESTIGADORES
VIZIOLI nora Matilde
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la interacción entre nanopartículas magnéticas y proteínas por electroforesis capilar
Autor/es:
SOTO, S; DABAS, P; VIZIOLI, NM; CARBALLO R
Lugar:
Santa Rosa, La Pampa
Reunión:
Congreso; 10º Congreso Argentino de Química Analítica; 2019
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Químicos Analíticos
Resumen:
El aumento de la selectividad en las separaciones es un desafío constante para los químicos analíticos, lo cual ha conducido al desarrollo de una gran cantidad y variedad de materiales1.Entre ellos se encuentran las nanopartículas magnéticas (NPM) que pueden modificarse con polímeros naturales o sintéticos, con la finalidad de incorporar en su superficie grupos que les confieran algún tipo de funcionalidad que les permitan establecer interacciones de mediana y alta especificidad con los analitos. Dentro de los compuestos naturales, las porfirinas resultan de especial interés por poseer ion metálico central cuyas propiedades pueden transmitirse a las NPM cuando se las recubre con estas sustancias. En este trabajo se estudió la interacción entre las NPM modificadas con complejos metal-protoporfirina y dos proteínas de amplia diferencia en peso molecular: angiotensina I (1,3 kDa) y proteína fluorescente verde (GFP, 26,9 kDa).Las NPM se sintetizaron por co-precipitación de sales de hierro en medio alcalino y atmósfera inerte2. Posteriormente, fueron modificadas con la metal-porfirina correspondiente en medio orgánico3.Tanto las NPM desnudas como las funcionalizadas con Cu-protoporfirina (CuPP@NPM) o modificadas con Ni-protoporfirina (NiPP@NPM) fueron caracterizadas por microscopía SEM, potencial zeta, magnetometría y espectroscopia de UV-Visible e IR con transformada de Fourier.Para estudiar la interacción entre las NMP y las biomoléculas se emplearon electroforesis capilar (CE) y espectroscopía de fluorescencia. En una primera etapa se optimizaron las condiciones de incubación: pH, tiempo de contacto y concentración del analito, empleándose cantidades fijas de CuPP@NPM y de angiotensia I. El rango de pH fue de 2,5 a 10,0 en buffer fosfato 50 mM. El sobrenadante separado fue analizado por CE usando como electrolito de corrida un buffer fosfato 50 mM pH 7,0. En una segunda etapa se evaluaron las condiciones de desorción modificando el pH del buffer de elución, variando el porcentaje de acetonitrilo, de cloruro de sodio y de imidazol en su composición.Los resultados obtenidos mostraron una selectividad diferencial y alta adsorción (> 80 %) para la angiotensina I a pH7,0. La adsorción entre angiotensina I y CuPP@NPM ajustó al modelo de Langmuir-Freundlich durante los primeros 30 minutos de interacción (Kd: 3,3x10-7 mg/mL; qm: 0,92 mg/mL; n: 2,86), pero a mayores tiempos ajustó al modelo de Freundlich (kf: 3,29 mg/mL; n: 5,34), demostrando la presencia de interacciones de diferente intensidad entre las NPM y el péptido angiotensina I. Asimismo, se evaluó la interacción entre las NMP modificadas y la proteína GFP, que posee un Tag-6His. Los resultados mostraron que para dicha biomolécula, la adsorción es selectiva para las NiPP@NPM respecto de las CuPP@NPM.1Ka?ička V. Electrophoresis 2018, 39, 209-234.2Ramirez LP, Landfester K. Macromol. Chem. Phys. 2003, 204, 22?31.3Hamer M, Carballo RR, Cid N, Rezzano IN. Electrochim. Acta 2012, 78, 302-305.Este trabajo fue realizado con el financiamiento de la ANPCYT, CONICET, y la Universidad de Buenos Aires.