Evaluación de una columna monolítica polimérica en línea con electroforesis capilar para la retención selectiva y separación de péptidos

VIZIOLI NM; GRASSELLI M; RUSELL ML; SIRUFFO C

Huerta Grande, Córdoba

Congreso; II Congreso Argentino de Químicos Analíticos, CAQA II; 2003

La integración de distintas operaciones en un proceso analítico es frecuentemente dificultosa. El uso de compuestos capaces de seleccionar mediante algún tipo de afinidad un grupo de analitos permite simplificar aquellas muestras que sean complejas facilitando, en consecuencia, la identificación y caracterización de las biomoléculas. Dichos compuestos pueden ser inmovilizados sobre partículas o estructuras porosas (microextractores) que, acopladas en línea con técnicas separativas de alta resolución y gran versatilidad, como lo es la electroforesis capilar (CE), permiten la separación de los analitos enriquecidos y/o altamente purificados. Con el fin de obtener un modelo de microextractor que evitara el uso de fritas, se sintetizó en capilares de sílica fundida un material macroporoso monolítico por polimerización de ésteres de metacrilato, iniciada por irradiación sobre una fuente gamma de 60Co. Los monolitos se modificaron químicamente con ácido iminodiacético y Cu(II) y se acoplaron al capilar de separación. Este sistema fue empleado para la retención selectiva de péptidos que tienen residuos de histidina en su estructura y posterior separación por CE en solución libre. Los monolitos modificados fueron caracterizados en términos de peso, flujo y cantidad de ion Cu(II) inmovilizado. Se ensayó el péptido angiotensina I (dos residuos de histidina) para evaluar el comportamiento del nuevo sistema, efectuando su elución por intercambio de ligando con una solución de imidazol. La interacción de la angiotensina I con el soporte fue evaluada determinando la cantidad de péptido retenido en el monolito en función de diferentes concentraciones de péptido y los resultados obtenidos demostraron ajustarse a la isoterma de adsorción de Langmuir, estimándose a partir de la misma la constante de disociación de la interacción (KD). La reutilización de las microcolumnas monolíticas así como la precisión en el día y entre días también fueron evaluadas, observándose la necesidad de regenerar el contenido del ion Cu(II) cada cinco corridas. Además se verificó que aún después de veinticinco ensayos, con las correspondientes regeneraciones del ion Cu(II), su rendimiento era apropiado. Finalmente se aplicó el método a una muestra que contenía los péptidos angiotensina I, oxitocina, hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH) y metionin-encefalina, comprobándose que sólo eran retenidos en la microcolumna los que contenían histidina en su estructura (angiotensina I y LHRH). Por su preparación rápida, sencilla y reproducible, los capilares monolíticos resultaron altamente recomendables para la construcción de microextractores en línea con CE.