CARACTERIZACIÓN DE ENZIMAS PROTEOLÍTICAS PRODUCIDAS POR MICROORGANISMOS PSICRÓFILOS Y PSICROTOLERANTES DE LA ISLA DE LOS ESTADOS, ARGENTINA.

CYNTHIA CABALLERO; CYNTHIA SEQUEIROS; NELDA OLIVERA

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Microbiología; 2004

Asociación Argentina de Microbiología

Los microorganismos adaptados a ambientes altamente selectivos son una fuente potencial de enzimas con propiedades catalíticas de valor tecnológico. En particular, las enzimas producidas por microorganismos adaptados a ambientes fríos poseen alta actividad específica a bajas temperaturas y menor termoestabilidad que sus contrapartes mesófilas, propiedades valiosas para diversas aplicaciones industriales y de bioremediación. El objetivo del presente estudio fue aislar y seleccionar microorganismos psicrófilos y psicrotolerantes productores de proteasas extracelulares activas a baja temperatura. La Isla de los Estados, situada en el extremo oriental del archipiélago fueguino, entre los paralelos 54º 38' y 54º 54' S y los meridianos 63º 47' y 65º 46' W, es un ambiente particularmente interesante debido a la limitada información microbiológica disponible. Las temperaturas medias oscilan de máximas cercanas a los 11°C en los meses de verano, a mínimas de alrededor de 1°C durante el invierno. Se analizaron muestras de sedimentos intermareales de distintos puntos de dicha Isla. Mediante ensayos de difusión en placas conteniendo en el medio de cultivo leche descremada, se detectaron 22 aislamientos con actividad proteolítica (zonas claras alrededor de las colonias producto de la  hidrólisis de caseína). Estudios de actividad caseinolítica residual a 10°C y termoestabilidad de los extractos enzimáticos crudos,  y  el análisis de la capacidad de crecimiento a baja temperatura permitieron seleccionar 3 de los aislamientos. El análisis de las secuencias parciales de sus ARNr 16S demostró que uno de ellos pertenecía al género Pseudoalteromonas y los dos restantes a Colwellia. En el presente estudio se describe la caracterización de la actividad proteolítica de uno de los aislamientos, Colwellia IE1-3 sp. Este microorganismo crece en el rango de 0 a 25°C, con un óptimo entre 15 y 20°C. El extracto enzimático crudo mostró un pH óptimo de actividad caseinolítica entre 8 y 9. La temperatura óptima fue de entre 30 y 40°C, mientras que la termoestabilidad a esas temperaturas fue limitada (40 % de actividad residual luego de10 min. a 40°C y pérdida total de actividad luego de 5 min. a 50°C). Mediante SDS-PAGE y zimograma se detectaron tres bandas activas cuyos pesos moleculares aparentes fueron de entre 54  y 37 kDa. La actividad proteolítica del extracto fue parcialmente inhibida por PMSF (36% actividad residual), 1,10-Fenantrolina (35% actividad residual) y EDTA (21% actividad residual) sugiriendo la presencia de proteasas serínicas y metaloproteasas.