INVESTIGADORES
OLIVERA nelda Lila
congresos y reuniones científicas
Título:
Características de la actividad proteolítica de Bacillus patagoniensis, una nueva especie de bacteria alcalitolerante.
Autor/es:
NELDA OLIVERA; CYNTHIA SEQUEIROS,; FAUTINO SIÑERIZ,; JAVIER BRECCIA,
Lugar:
Bahía Blanca
Reunión:
Congreso; XI Jornadas Argentinas de Microbiología- II Jornadas de Microbiología e Infectología del Sur Argentino.; 2005
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
En el marco de estudios destinados a seleccionar microorganismos productores de enzimas proteolíticas extracelulares de distintos ambientes de la región patagónica, se aisló la cepa PAT 05T de la rizósfera del arbusto perenne Atriplex lampa, en la región noreste de la Provincia del Chubut. En base a estudios fisiológicos y genéticos se determinó que esta cepa correspondía a una nueva especie dentro del grupo de Bacillus alcalófilos. Dicha especie se validó bajo el nombre de Bacillus patagoniensis, cuya cepa tipo es PAT 05T. El objetivo del presente estudio fue caracterizar la actividad proteolítica de Bacillus patagoniensis PAT 05T, y evaluar su potencial biotecnológico. Se analizaron los sobrenadantes de cultivos en un medio con proteína de soja como sustrato de crecimiento, 100 mM de Na2CO3 (pH 10) y NaCl 5%, luego de 72 hs de incubación a 25°C y 200 rpm. La actividad proteolítica se determinó empleando azocaseína como sustrato (0,5 % p/v en la mezcla de reacción). El extracto presentó máxima actividad a una temperatura de 60 ºC y en un  rango de pH 9-12. La actividad proteolítica residual fue del 91 % luego de 3 hs a 40°C, mientras que a 50, 60 y 70°C dicha actividad disminuyó a 50, 16 y 6 %, respectivamente. La actividad proteolítica fue estable en un rango de pH 7-12, conservando más del 85 % de la actividad original luego de 3 hs de incubación. La actividad del extracto fue fuertemente inhibida por PMSF sugiriendo la presencia de proteasas serínicas. Dicha actividad no fue afectada por H2O2 (10 %), 1,10-Fenantrolina (10 mmol l-1), DTT (1 mmol l-1), Triton X-100 (1 %) y Tween 20 (1 %). Más del 80 % de actividad residual se observó en presencia de 10 mmol l-1 EDTA y 4 mol l-1 Urea, 73 % con SDS (1 %) y 63% con 2 mol l-1 NaCl. El análisis por SDS-PAGE sin b-mercaptoetanol  del sobrenadante permitió establecer la presencia de dos bandas activas, con masas moleculares aparentes de 31 y 18 kDa aproximadamente. El IEF-zimograma reveló la presencia de una fracción activa de pI > 9.3. Dadas las características de la actividad proteolítica de la cepa Bacillus patagoniensis PAT 05T , tales como alta actividad y estabilidad a elevados valores de pH y concentraciones salinas tanto como estabilidad ante agentes oxidantes, quelantes y surfactantes, este microorganismo podría constituir una fuente promisoria de enzimas útiles para la formulación de detergentes y la industria del cuero entre otras aplicaciones.