Bioprospección de actinomicetes nativos de la región patagónica con actividad antimicrobiana contra patógenos de peces

NELDA LILA OLIVERA; MARÍA SOLEDAD VELA GUROVIC

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología; 2013

Asociación Argentina de Microbiología

En acuicultura, como en otras prácticas, el uso de antibióticos ha llevado asociada la aparición de cepas bacterianas resistentes a los antibióticos convencionales por lo que la búsqueda de nuevas moléculas antimicrobianas es de suma importancia para combatir las infecciones bacterianas. El objetivo del presente estudio fue analizar el potencial antimicrobiano de cepas de actinomicetes nativas de suelos y filósfera de especies (Prosopis alpataco, Larrea divaricata, Atriplex lampa y Chuquiraga avellanedae) de la región patagónica contra diversas bacterias patógenas de peces. Las muestras de suelo fueron aisladas en medio sólido vitaminas-ácido húmico [Hayakawa y Nonomura, 1987, J. Ferment. Technol. 65, 501-509], con el agregado de nistatina (50 μg/ml) e incubadas a 25°C por cuatro semanas. Los aislamientos fueron cultivados en medios típicos para el cultivo de actinomicetes y otros especiales para la producción de antibióticos. Los cultivos se incubaron 5 días a 30°C y 220 rpm, se centrifugaron (10 min 8.000 rpm) y se evaluó la actividad antimicrobiana de los sobrenadantes mediante el ensayo de difusión en agar usando las cepas indicadoras patógenas de peces Gram negativas Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida, Vibrio anguillarum y Yersinia ruckerii, y Gram positivas Carnobacterium piscicola y Lactococcus garvieae. Se aislaron 35 cepas de las cuales 3 (aisladas de suelos) y 1 (aislada de la filósfera de A. lampa) presentaron actividad contra al menos una de las cepas indicadoras. Se destacó el aislamiento SUE01 que presentó actividad contra todos los patógenos al ser cultivado en el medio para la producción de calicheamicina (medio cal.). Este aislamiento presentó un 99,15 % de homología en su secuencia parcial (478 pb) del gen que codifica ADNr 16S con Streptomyces lateritius LMG 19372T; especie productora de antibióticos del tipo de las granaticinas, activas principalmente contra bacterias Gram positivas. A su vez, la actividad antimicrobiana no se vio afectada por el tratamiento con proteasas, lo cual descarta un principio activo de tipo peptídico. La actividad contra Gram positivas y negativas fue monitoreada durante 5 días para los cultivos de SUE01 en medio cal y medio ISP-2, y la aparición de pigmentos mediante absorción a 400 y 600 nm. La actividad en medio cal se asoció a los pigmentos violáceos durante las primeras 48 hs. La formación de pigmentos rosados en ISP-2 acompañó a la actividad hasta las 72 hs, a partir de este punto la producción de pigmentos no se relacionó con la actividad. Los resultados obtenidos luego del análisis de los perfiles metabólicos por TLC [Elson et al. 1988. J. Antibiot. 41, 570-572.] y HPLC (C18, MeOH/H2O, flujo 1 mL/min, detector DAD) indican que compuestos del tipo de las granaticinas se encontrarían en medio ISP-2 y no en medio cal, y que en este último se sintetizan sustancias que presentan un mayor espectro de actividad.