Isla de patogenicidad con combinación genética única de genes pesticidas en el genoma de Bacillus thuringiensis INTA H42-1

ORTÍZ, L.M; SALAS, A.; BOSIO GUARAZ, A; FERNÁNDEZ GÖBEL, T; NIEVES, E; MICIELI, M.V; SAUKA, D.H.

CABA

Congreso; VI CAMAYA; 2025

Asociación Argentina de Microbiología

Bacillus thuringiensis, una bacteria Gram positiva, es reconocida por su capacidad para controlar plagas de invertebrados gracias a la producción de proteínas con actividad pesticida. En estudios previos, se seleccionó la cepa argentina B. thuringiensis INTA H42-1 por su alta toxicidad contra Cydia pomonella (Lepidoptera: Tortricidae) y su perfil genético atípico de genes pesticidas, identificado mediante amplificación génica (PCR). Estas dos características la posicionan como un candidato prometedor para un bioinsecticida destinado al control de la carpocapsa. El objetivo de este trabajo fue confirmar el contenido genético relacionado con proteínas pesticidas y analizar su entorno genético mediante secuenciación masiva, además de ampliar el conocimiento sobre su potencial biocida frente a otras especies. Se extrajo ADN total con un kit comercial y se secuenció usando tecnologías Illumina (paired-end, 150 pb) y Nanopore. El ensamblaje híbrido se realizó con Unicycler en la plataforma Galaxy, y la anotación se llevó a cabo con Prokka; los genes pesticidas se corroboraron mediante la base de datos BPPRC. Se realizaron bioensayos cualitativos con suspensiones de esporas y cristales contra Plodia interpunctella (Lepidoptera: Pyralidae), Alphitobius diaperinus (Coleoptera: Tenebrionidae) y Aedes aegypti (Diptera: Culicidae). Para P. interpunctella y A. diaperinus, las suspensiones se incorporaron en la dieta a concentraciones finales de 100 y 500 µg/ml, respectivamente, mientras que para A. aegypti, se aplicaron directamente en agua a una concentración final de 10 µg/ml. El ensamblaje genómico arrojó un scaffold de 5.643.782 pb (35,1% G+C), compuesto por tres contigs y 13 plásmidos. El megaplásmido pINTAH42-1.2 (250.706 pb) contiene una isla de patogenicidad de aproximadamente 48.167 pb, que incluye los genes cry1Ac y cry2Aa, ambos con un 100% de similitud a las secuencias de referencia. Dentro de esta isla se identificaron también genes relacionados con integración y excisión, como xerS, tnpA y tnpB, así como el gen xlyA, vinculado a fagos. Por otra parte, el plásmido pINTAH42-1.6 (69.355 pb) incluye el gen para la proteína pesticida Cry1Ab. La cepa mostró alta actividad biocida, con mortalidades del 80% y 85% contra P. interpunctella y A. aegypti, respectivamente, mientras que contra A. diaperinus, la actividad fue inferior al 19% en las condiciones ensayadas. Estos resultados confirman el potencial de la cepa INTA H42-1 como candidato para un bioinsecticida, sustentado en su caracterización genómica y eficacia biológica.