Clonado y expresión de dos diglicosidasas de interés biotecnológico

BARBARA D NEHER; LAURA S. MAZZAFERRO; GISELA WEIZ; LUCAS E BRAUN; JORGE OYHENART; MICHAEL KOTIK; VLADIMIR KREN; JAVIER D. BRECCIA

Simposio; III Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos; 2014

Hesperidina (hesperetina 7-O-α-ramnopiranosil-β-glucopiranosido) es abundante en los frutos cítricos y contribuye a la opacidad y sabor agrio de los jugos. La hidrólisis enzimática con monoglicosidasas se ha empleado para reducir el sabor amargo y para clarificar estos productos. Las diglicosidasas permiten completar la desglicosilación en un solo paso independientemente de las concentraciones diferenciales de los sistemas multienzimáticos. Por otro lado, las diglicosidasas capaces de transglicosilar azúcares son herramientas prometedoras para la síntesis de glicósidos bioactivos a medida. El objetivo de este trabajo fue clonar y expresar dos diglicosidasas capaces de remover la fracción sacarídica del flavonoide hesperidina y una de ellas capaz de trasglicosilar el disacárido sobre aceptores con oxidrilos primarios, secundarios y fenólicos. El origen de estas enzimas fueron la bacteria Actinoplanes sp. SES612 y el hongo Acremonium sp. DSM24697. Se logró la expresión funcional de la diglicosidasa de origen procariota (Actinoplanes sp. SES612). Este sistema permite mayor producción en menor tiempo, con medios de cultivos más económicos y una purificación más sencilla.La expresión de la 6-O-α-ramnosil-β-glucosidasa del hongo Acremonium sp. DSM24697 se logró en ambos sistemas E.coli y P. pastoris.