Inmovilización de glicosil-hidrolasa en fibras magneticas

MINIG, MARISOL; MAZZAFERRO, LAURA; PIÑUEL, LUCRECIA; BRECCIA, JAVIER D.

Trelew, Chubut

Jornada; I Jornadas Patagonicas de Biologia; 2009

Universidad Nacional de la Patagonia San Juan Bosco

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} @page Section1 {size:595.3pt 841.9pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:35.4pt; mso-footer-margin:35.4pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> El uso de enzimas inmovilizadas en un soporte sólido ofrece varias ventajas como son mayor estabilidad, posibilidad de reutilizar el biocatalizador, aplicación a sistemas continuos y en particular permite detener la reacción enzimática por un simple proceso de remoción del mismo (por ejemplo por filtración) evitando así la presencia de la enzima en el producto final. El empleo de fibras magnéticas como soporte tiene grandes ventajas como su extensa área superficial y la facilidad de separación del biocatalizador inmovilizado por la aplicación de un campo magnético. La cepa Hypocreales sp. SES201 aislada en nuestro laboratorio, produce una hidrolasa disacárido específica, capaz de hidrolizar hesperidina en sus dos componentes: el disacárido rutinosa y la flavanona hesperetina. Esta fue inmovilizada sobre fibras magnéticas, partiendo de 1.72 nKat mg-1 de extracto crudo liofilizado en contacto con 200 mg de fibras y glutaraldehído como agente de entrecruzamiento. La inmovilización demostró una eficiencia de un 49%. La temperatura óptima de la enzima soluble es de 60 °C, mientras que la enzima inmovilizada presentó una disminución de la temperatura óptima pH-dependiente, así a pH 5-7 la temperatura óptima disminuyó 10 °C mientras que a pH 9.0 esta disminuyó 20 °C. Esta disminución de la temperatura óptima sugiere una mayor exposición al solvente que se refleja en una mayor inestabilidad del péptido. Sin embargo en el proceso de biocatálisis luego de 3 ciclos de reutilización la enzima mantuvo más del 90 % de la actividad inicial